(标)应用搅拌罐式生物反应器的细胞培养技术.ppt

8 应用搅拌罐式生物反应器的细胞培养技术---及其该工艺发展的远景撰稿：Vikram Gossain,Ph 编译：吴晨，NBS 公司上海代表处 概论 细胞培养的基本知识 细胞培养的发展趋势 哺乳动物细胞培养工艺的发展 哺乳动物细胞培养方法之一：悬浮工艺 哺乳动物细胞培养方法之二：微载体工艺 哺乳动物细胞培养方法之三：固定床工艺 哺乳动物细胞的大规模培养 细胞培养要素 ---第一步：选择表达系统 表达系统：细菌； 酵母； 真菌； 植物细胞； 哺乳动物细胞； 细胞培养要素 ---第一步：选择表达系统 表达系统的发展趋势：哺乳动物细胞表达系统 原因：细胞培养技术的研究的最终目的是治疗人类疾病，而功能性哺乳动物蛋白与微生物蛋白又有区别。动物细胞中的分泌蛋白为了其功能的实现，大都是糖基化蛋白，而微生物蛋白却不是。因此，与人类细胞表达系统最相近的是哺乳动物细胞表达系统，并非是目前用的很多的微生物的表达系统。 我们今天的介绍都是以哺乳动物细胞表达系统为基础的 细胞培养要素 ---第二步：确定培养基配方 培养基的优化应该向着两个方向： -有利于细胞生长 -有利于产物的制造 产物需要满足越来越高的国家标准或者行业标准： 例如： 宿主细胞DNA残留：≤10pg（VERO细胞灭活乙脑疫苗）； 牛血清残留：＜35ng； …….. 注意：需要在进行生产工艺之前确定培养基的组成，如果使用了不当的培养基，在进行大规模培养工艺的过程中，会浪费许多金钱和时间。 细胞培养要素 ---生物反应器技术（基于哺乳动物细胞表达系统） 一旦表达系统和培养基都已确定好，那么你就该把注意力放在培养工艺上了。 这就是下面我们所要讨论的所有内容。 细胞培养要素---总结 细胞培养的基本知识： 选择表达系统； 确定培养基配方； 寻找最适生物反应器； 通过分别优化这三个细胞培养的重要组成部分，使细胞培养向着更高的单位生产率和容产率这两个生产目标前进 细胞培养工艺发展 我们应该走那条路？ 细胞培养工艺的发展 表达系统：基于哺乳动物细胞表达系统 培养基配方：根据表达系统、产物、生产力等多方面确定 培养工艺和生物反应器？ 哺乳动物细胞培养工艺的发展 第一部分：悬浮工艺 第二部分：微载体工艺 第三部分：固定床工艺 我们需要得出：使用哪种工艺才能达到我们的细胞培养目的 哺乳动物细胞培养工艺的发展 选择反应器类型时需要考虑的因素： 使用何种培养模式进行细胞培养？批次培养，半批次培养，还是连续流加培养或者灌注培养。 是否有接种病毒的步骤？ 接种病毒后的培养模式是否需要改变？ 细胞密度应该维持在多少才能既满足细胞生长又满足产物的最佳产量？ 哺乳动物细胞培养工艺的发展 需要多大的工作体积？ 是否需要更换培养基？使用无血清培养基？你可能需要一种培养基可以快速增大细胞密度，然后需要另外一种培养基来使细胞更好的分泌目标产物。 活细胞中最多可以承载多少个病毒的生长繁殖？（MOI） 各个工艺之间有什么区别？ 收获的产物是什么以及怎样进行收获？ 例如：连续流加培养模式 例如：连续流加培养模式 ◆在这个培养模式中，你可以维持某一种化学营养组成的水平不变，如葡萄糖。 ◆可以维持最佳的细胞密度和分布状态 ◆与灌注模式的不同是它没有细胞节流装置 哺乳动物细胞培养工艺的发展 哺乳动物细胞培养的发展目标： 更高的生产力 更强的放大能力（达到大规模培养） 通过相关认证标准 哺乳动物细胞培养工艺的发展 为了达到相对灵活的目的，使用一个搅拌罐式生物反应器系统会比较合适 搅拌罐式生物反应器具有以下特点： 比较容易的实现大规模生产 简单的达到较高的生产水平 不同细胞培养方式比较 哺乳动物细胞培养工艺的发展 悬浮 微载体 固定床 哺乳动物细胞培养之悬浮工艺 1.适合的培养对象：悬浮细胞或者被驯化成为悬浮培养的细胞 2.产物类型：细胞通常就是所需的产物 3.能够稳定传代（仅有细胞培养工艺） 4.病毒接种（培养细胞之外，接种病毒工艺） 5.适用的搅拌桨类型：倾角式或船桨式的搅拌桨 6.适合的培养方式：批次培养、半批次培养工艺（加入部分营养成分）、连续灌注培养工艺 7.适合的细胞培养密度：较低或者中等的细胞密度 哺乳动物细胞培养之悬浮