《植物发育生物学研究方法》.ppt

植物发育生物学研究方法;*;植物发育生物学常用研究方法及原理;突变体的诱导与选择正向遗传学;突变体的诱导与选择;突变体的诱导与选择;突变体选择的概念 组织培养筛选突变体的方法，又称离体筛选。 组织培养过程中表现出的变异，体细胞无性系变异 在培养基中加选择压（化学物质）诱导产生变异，具有定向突变特征。 植物细胞工程目前分为五个分支： 脱毒与快速繁殖。 细胞的大量培养。 体细胞杂交。 细胞遗传转化及产生转基因植株。 无性系变异与分离突变体。 后三者则主要利用遗传变异，创建新种质。; 离体筛选的优点： 离体筛选突变体的可控程度高，便于进行定向选择。 突变频率高，筛选群体大，在较小容器中可操作百万到千万个植物细胞。 离体筛选的意义： 对农作物形状进行遗传改良；为细胞杂交和转基因技术提供选择标记，如互补选择；对突变体细胞进行遗传及生理代谢研究。 突变是遗传变异性的终极来源，它为种群变异提供原材料。是体现生物多样性和适应多变环境的重要方式。;二、变异的类型;;;;;;;;;定向基因突变;;基因沉默反向遗传学;基因沉默的概念及发现;RNAi的发现;RNA interference ;;RNAi的提出;RNAi广泛存在于自然界;RNAi的定义 ;如果将其作为一门生物技术，则定义为 ： ① RNAi 是指通过反义RNA与正链RNA 形成双链RNA 特异性地抑制靶基因的现象,它通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA(有义RNA 和反义RNA) ,从而诱导内源靶基因的mRNA 降解,达到阻止基因表达的目的。 ② RNAi是指体外人工合成的或体内的双链RNA（dsRNA）在细胞内特异性的将与之同源的 mRNA降解成21nt～23nt 的小片段，使相应的基因沉默。 ③ RNAi是将与靶基因的mRNA 同源互补的双链RNA(dsRNA ) 导入细胞,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失, 属于转录后水平的基因沉默(post - transcriptional gene silence , PTGS)。 ;RNAi 机制 ;RNAi作用的简单模型;RNAi引发的基因沉默机制;RNAi在植物与其他生物中的差异 ;RNAi研究的一般技术路线;RNAi的效果分析;RNAi在植物功能基因组研究中的应用 ;RNAi在作物品质改良中的应用 ;利用RNA沉默产生抗病毒植物 ;;蛋白质相互作用研究技术 ;蛋白质之间相互作用以及通过相互作用而形成的蛋白复合物是细胞各种基本功能的主要完成者。几乎所有的重要生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分泌、信号转导和代谢等等，都离不开蛋白质之间的相互作用。 ;酵母双杂交 谷胱苷肽-S-转移酶沉淀试验(GST-pull down） 免疫共沉淀 双分子荧光互补技术(BIFC) 生物发光共振能量转移（BRET）技术;一、细菌双杂交系统; 酵母激活因子 GAL4：N端：147个氨基酸组成的DNA结合域(BD)， C端：113个氨基酸组成的转录激活域(AD)。GAL4分子的DNA结合域可以和上游激活序列(upstream activating sequence，UAS)结合，而转录激活域则能激活UAS下游的基因进行转录。 组成部分：（1）与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白（bait）；（2）与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白（prey）；（3）带由一个或多个报告基因的宿主菌株。 ;酵母双杂交实验过程;;酵母双杂交基本过程;二、谷胱苷肽-S-转移酶沉淀试验(GST-pull down）原理;三、免疫共沉淀原理;四、双分子荧光互补技术( bimolecularfluorescence complementation , BIFC);BIFC的优势;;五、生物发光共振能量转移（BRET）技术;;dsfdbsy384y982ythb3oibt4oy39y409705923y09y53b2lkboi2y58wy0ehtoibwoify98wy049ywh4b3oiut89u983yf9ivh98y98sv98hv98ys9f698y9v698yv98x98tb98fyd98gyd98h98ds98nt98d8genklgb4klebtlkb5k tkeirh893y89ey698vhkrne lkhgi8eyokbnkdhf98hodf hxvy78fd678t9fdu90gys98y9shihixyv78dfhvifndovhf9f8yv9onvkobkw kjfegiudsfdbsy384y982ythb3oibt4oy39y409705923y09y53b2lkboi2y58wy0ehtoibwoify98wy049yw