食品中有害物质的检测.ppt

3．花生（脂肪含量15.0－45.0％）样品去壳去皮粉碎后称取20.0g，加入250mL具塞三角瓶中，准确加入100.0mL甲醇-水(55＋45）溶液和30mL石油醚,盖塞后滴水封严，150rpm振荡30min，静置15min后用快速定性滤纸过滤于125mL分液漏斗中，待分层后，放出下层甲醇-水溶液于100mL烧杯内，从中取20.0mL（相当于4.0g样品）置于另一125mL分液漏斗中，加入20.0mL三氯甲烷，振摇2min，静置分层（如有乳化现象可滴加甲醇促使分层）．放出三氯甲烷于75mL蒸发皿中，再加5.0mL三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取后，放出三氯甲烷层一并于蒸发皿中，以下按上述“65℃水浴通风挥干”起，依法操作。4．植物油用小烧杯称取4.0g样品，用20.0mL石油醚，将样品移于125mL分液漏斗中，用20.0mL甲醇-水(55＋45）溶液分次洗烧杯，溶液一并移入分液漏斗中。（精炼油4.0g样为4.525mL，可直接用移液器加入分液漏斗再加溶剂后振摇）振摇2min，静置分层后，放出下层甲醇-水溶液于75mL蒸发皿中。再用5.0mL甲醇-水溶液重复振摇提取一次，提取液一并加入蒸发皿中，以下按自“65℃水浴通风挥干”起，依法操作。5．其它食品：可按照前面方法有关章节操作，最终提取物（相当于4.0g样品）应收集于2.0mL甲醇一PBS(20＋80)中。（二）样品测定1、将下列试剂稀释后备用PBS一T洗液：390mL蒸馏水稀释（1:40）；底物液A:9mL蒸馏水稀释（1:9）；抗体:7.0mL洗液稀释（1:140）；酶标二抗:10mL洗液稀释（1:200）；阴性对照液:200μl抗体十200μl空白对照液在玻璃试管内混合振荡后静置。2、抗体抗原反应将抗体与等量样品提取液在玻璃试管内混合振荡后室温静置15分钟。启封酶标板，用洗液2×3分钟洗板后在吸水纸上拍干，分别在适当孔位加入此抗体抗原反应液及空白对照液（3孔）和阴性对照液（3孔）,130μl／孔,37℃湿盒中孵育（或加盖以保持相对湿度），2小时后，倒掉反应液并拍干,用洗液3×3分钟洗板，拍干。3、酶标记反应加入酶标二抗，100μl／孔，37℃盒中孵育1小时后，用洗液5×3分钟洗板，拍干。4、显色反应lmg底物+2.5m1底物液A＋42μl底物液B，待底物充分溶解后加入酶标板，100μl／孔，37℃15分钟后加终止液40μl／孔。5、测定酶标仪490nm测定各孔OD值。数据处理及计算结果：lgCOD%标准竞争抑制曲线薄层层析法(GB1法)和液相色谱法：可定性、定量，应用广，检测周期长,程序复杂,所需试剂繁多。免疫化学分析方法（如酶联免疫法(GB2法)、胶体金免疫层析试纸法）：快速,简便,特异,敏感,低耗，不需贵重仪器。适合大量样品的筛检及现场检测。受环境影响，可能会出现假阳假阴。常见的动物性天然有害物质1.动物肝脏中的毒素（胆酸）2.河豚毒素3.岩蛤毒素4.螺类毒素5.组胺常见的植物性天然毒素1.氰苷2.红细胞凝集素3.龙葵碱4.秋水仙碱5.棉酚6.毒蘑菇第九节食品中其他有害物质及其检测天然有害物质食品中苯并(a)芘食品中苯并(a)芘的测定方法：GB/T5009.27-2003①荧光分光光度法试样经提取（如环己烷）、或经皂化后提取，净化后于乙酰化滤纸上层析分离苯并(a)芘，在波长365nm的紫外灯下观察（蓝紫色荧光）斑点，剪下，用苯浸出，测定荧光强度。②目测比色法同上，直接在滤纸上与标准斑点进行目测比色概略定量。苯并(a)芘（多环芳烃）是烟熏食品、煎炸食品和焙烤食品中主要的毒素和致癌物。乙酰化：引入乙酰基CH3CO-，常用乙酸酐做乙酰化试剂。盐酸克伦特罗的测定动物性食品中克伦特罗残留量的测定：GB/T5009.192-2003①GC-MS②HPLC③ELISA原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法GB/T22388-2008①HPLC试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。②LC-MS③GC-MS2、速测卡符合率：在检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。3、葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提