微生物药物产生菌.ppt

**************3、高通量筛选高通量筛选（highthroughputscreening）技术是20世纪80年代后期形成的寻找新药的高新技术。将许多模型固定在各自不同的载体上，用机器人加样，培养后用计算机记录结果，并进行分析，可以实现大规模的筛选。第64页,共64页，2024年2月25日，星期天****************新药产生菌不一定为新菌，新菌可能性大*******rosebengal玫瑰红,二碘曙红****任氏(Ringers)生理盐水是生理学实验常用的生理盐溶液。任氏(Ringers)生理盐水氯化钠6.5克碳酸氢钠0.2克氯化钾0.14克磷酸二氢钠0.01克氯化钙0.12克先把氯化钠,氯化钾,碳酸氢钠,磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中,混合后用蒸馏水稀释到980毫升.然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中,把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内,边滴,边搅拌,以免产生不溶解的磷酸钙沉淀.****（5）培养条件一般培养温度为25~30℃，也有32~37℃，培养7～14d，生长慢的放线菌可延长培养1个月；分离高温放线菌用45～50℃培养1～2d；海水放线菌用20℃培养6周左右。第32页,共64页，2024年2月25日，星期天（6）稀有放线菌的选择性分离稀有放线菌的特征：生长速度比较缓慢；营养需求较为复杂；比较缺乏孢子分化的能力；不能稳定保存。第33页,共64页，2024年2月25日，星期天分离几种稀有放线菌的方法稀有放线菌种类形态特征预处理方法分离方法分离方法的特征马杜拉放线菌100℃加热15min，并悬浮于无菌的25％（V/V）Ringer’s溶液中悬浮液涂布于含有100ug/mL放线菌酮、25ug/mL利福平的固体培养基上高温处理土样与使用含有利福平的固体培养基相结合的选择性分离方法第34页,共64页，2024年2月25日，星期天稀有放线菌种类形态特征预处理方法分离方法分离方法的特征游动放线菌不形成真正的气生菌丝，并且菌落呈鲜艳的橘黄色。营养菌丝上形成孢子囊。游动孢子由成熟的孢子囊产生。土样浸泡于饱和的硫酸镁盐溶液中，再洗去镁盐，干燥土样。将经过干湿处理后的土样涂布于几丁质琼脂上，可得到大量的游动放线菌利用了生物趋化方法分离几种稀有放线菌的方法第35页,共64页，2024年2月25日，星期天稀有放线菌种类形态特征预处理方法分离方法分离方法的特征小单孢菌大多数种缺乏气生菌丝，形成橘黄色或橘红色的菌落孢子；分化的菌落表面变成黑色或暗褐色，有时呈光滑或粘稠。单孢子只在营养菌丝上形成，没有运动性。碱处理有效的降低了革兰氏阴性细菌的生长含有衣霉素的固体培养基可选择性的支持小单孢菌的生长将土样进行碱处理和使用含有衣霉素的固体培养基相结合的独特方法分离几种稀有放线菌的方法第36页,共64页，2024年2月25日，星期天稀有放线菌种类形态特征预处理方法分离方法分离方法的特征诺卡菌大多数种形成蜡样的或有光泽的菌落而不形成气生菌丝，但也有一些种会产生不成熟的气生菌丝，营养菌丝可断裂成球状或杆状片断用石蜡棒在土壤样品的悬液中富集然后将石蜡从棒上剥离，接种到DST（Oxoid）琼脂平板上，25℃培养3w分离几种稀有放线菌的方法第37页,共64页，2024年2月25日，星期天稀有放线菌种类形态特征预处理方法分离方法分离方法的特征链孢囊菌营养和气生菌丝与链霉菌菌株一样发育良好，包含着不能移动孢子的孢囊位于气生菌丝的顶端可先将土样在室温风干，然后在120℃加热1h将处理后的土样或用土壤悬液涂布于含有维生素的培养基上分离几种稀有放线菌的方法第38页,共64页，2024年2月25日，星期天稀有放线菌种类形态特征预处理方法分离方法分离方法的特征北里孢菌属形态特征以及菌落特征与链霉菌属非常相似，但它们的细胞壁中含有LL-DAP、meso-DAP、甘氨酸、半乳糖，与链霉菌属完全不同50ug/mL新生霉素的培养基利用了北里孢菌属菌种对新生霉素具有抗性的特征分离几种稀有放线菌的方法第39页,共64页，2024年2月25日，星期天真菌的分离常用马铃薯葡萄糖琼脂培养基、Martin培养基、察氏蔗糖（葡萄糖）琼脂培养基，pH偏酸性。为了抑制细菌的生长一般在分离培养基中加入β-内酰胺类和氨基糖苷类等抗生素。细菌的分离常用有机培养基，如牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、营养琼脂加氨基酸维生素的培养基等，pH偏碱性。分离时一般加入一定量的抗真菌抗