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细胞培养过程中抗体关键质量介绍及掌控专题（一）

随着抗体类药物被批准用于治疗各种疾病，特别是在新冠疫情暴发之后，在过去十几年的时间里，抗体已成为医药市场上脱销的药物种类之一、由于抗体药物结构的特殊性和多而杂性，导致了其质量的不均一性，而抗体质量属性如糖型、聚体、蛋白表面电荷的更改，会显著影响药物的安全性和有效性。因此，我们需要在药品制造过程中订立相应的掌控策略，来得到目标的抗体质量属性。

细胞培养过程作为抗体药物被细胞生产出来的阶段，其培养环境的更改对于细胞的代谢和状态均会产生很大的影响，从而影响抗体的质量。因此，在细胞培养阶段通过培养基筛选、小分子添加和工艺参数优化等方式，来优化抗体的质量属性来实现目标的安全性有效性，已经成为工艺开发过程中最紧要的步骤之一、

产品的关键质量属性（CriticalQualityAttributes,CQAS）,即对药物的安全性和有效性有影响的质量属性，潜在的CQA紧要包含片段化程度、聚体含量、电荷变体分布和糖基化构型等。它们与细胞胞内的蛋白翻译后修饰和细胞胞外的降解过程紧密有关，其差别紧要形成与药物的整个研发和生产过程中的细胞培养阶段。

培养过程中影响抗体质量属性的因素

通气

在哺乳动物细胞生物反应器中，通气是一个关键构成部分，特别是在高细胞密度下操作时，由于需要向细胞供应充分的氧气，同时必需去除二氧化碳，以防止其在培养液中积累。这通常使用气体鼓泡和顶空通气的组合来实现。在大型容器中，氧气通过使用气体鼓泡分散在底部相近来供应。生物反应器中使用的气体扩散器可以是多孔熔块鼓泡（由陶瓷、聚四氟乙烯或不锈钢制成）或钻孔鼓泡（DHS）。前者会产生较小的气泡，从而加添界面表面积和气体停留量，但也更容易引起泡沫，对CO2汽提效果不佳。因此，常常遇到双鼓泡设计。下表概述了常用的不同设计和通气配置。在大多数情况下，O2和CO2按需通入，以掌控溶氧水平和pH值，而空气则不绝通入，有时还供应到顶部空间。

氧气

在哺乳动物细胞培养中，溶氧水平通常保持在空气饱和度的10%到80%之间。过高的氧浓度会导致活性氧（ROS）的积累，这会导致线粒体呼吸链和细胞内氧化还原的变化，最终导致细胞生长抑制和特异性生产力下降。另一方面，低氧条件也会诱导ROS积累。研究已显示在20%DO下10天的长时间暴露会引起与在0.5%5%DO下暴露1—3天后察看到的相同的缺氧反应。缺氧条件也与摄氧量减少和乳酸产量加添有关。ROS积累与大规模（5,000L）条件下生产力的显著下降相关，而在小规模（20L）条件下没有遇到这种问题。因此，在规模放大过程中必需认真选择DO设定点；在仿佛的DO水平（空气饱和度%）下，与台式生物反应器相比，大型容器中的实际氧气浓度将显著更高。尽管表面通气减少了由气泡引起的剪切应力，但它对整体气体传输的贡献在更大的范围内变得可以疏忽不计。为了减少由气泡在气液界面分裂引起的剪切应力，将表面活性剂，如PluronicF—68（或KolliphorP188），添加到细胞培养液中。1g/L（和高达5g/L）范围内的Pluronic浓度通常用于供应剪切保护。

氧气传质系数（kLa）用于衡量系统的氧气传输本领。对于给定的生物反应器配置，依据以下公式，kLa紧要与单位体积功率输入（P/V）和表观气体速度（vs）相关，其中K是常数，指数和分别约为0.4和0.5

气泡大小、混合速度、气体流速、体积和生物反应器几何形状等工艺参数都会影响kLa。各种培养基成分，包含盐、消泡剂和表面活性剂，也已被证明会影响传质系数。特别是，消泡剂被发现可以显著降低kLa。PluronicF—68也会降低kLa，但程度较小，而盐的添加会加添氧传质系数。另一个影响kLa的因素是叶轮的数量。一般来说，仿佛几何形状的生物反应器规模的加添将导致kLa的加添，正如在传统搅拌罐和一次性生物反应器中所指出的那样。液体高度的加添导致更长的气体停留时间，从而允许更有效的气体转移。

二氧化碳

在哺乳动物细胞培养中，溶解的二氧化碳（PCO2）水平通常保持在4—10%的CO2饱和度（30—70mmHg）。高浓度的溶解CO2（150200mmHg）会对多种哺乳动物细胞的细胞生长和生产力产生不利影响。在CHO细胞培养中，高PCO2水平可抑制细胞生长、细胞生产力并变化产品质量。溶解在水中的CO2通过与水反应形成碳酸盐，其分解成碳酸，而引起酸化。培养液的酸化导致需在pH值掌控的培养中添加碱，从而导致渗透压加添。与正常水平（260—320mOsm/kg）相比，渗透压升高（460