2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体（教学课件）高中生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

第2章细胞工程第2节动物细胞工程第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体

与植物体细胞杂交有什么异同点？人细胞鼠细胞红色荧光染料标记的膜蛋白绿色荧光染料标记的膜蛋白细胞融合人鼠杂交细胞37°培养40min细胞融合温故知新2

概念：原理：诱导方法使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。细胞膜具有一定的流动性物理法：电融合法化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活病毒诱导法（仙台病毒）一、动物细胞融合技术与动物细胞膜结构有关P49页左上角3

P48相关信息灭活：是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。4

结果意义形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。一、动物细胞融合技术5

植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志结果意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合形成杂种植株形成杂种细胞打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能植物体细胞杂交和动物细胞融合比较6

应用研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。7

8知识回顾：抗体是如何产生、有什么作用二、单克隆抗体及其应用

1、传统抗体制备的方法产量低纯度低特异性差缺点：反复注射抗原动物产生抗体（B淋巴细胞）从动物的血清中分离抗体体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上9二、单克隆抗体及其应用如何获得大量、单一的抗体？每个B淋巴细胞（浆细胞）只分泌一种特异性的抗体。

二、单克隆抗体及其应用每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体B淋巴细胞不可能无限增殖10缺点：

动物细胞融合杂交细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞（能无限增殖）一种B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体）杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体一个极富创造力的方案1975年，米尔斯坦和科勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖二、单克隆抗体及其应用

注射抗原多种B淋巴细胞用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合多种杂交细胞用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体选择培养基(第一次筛选)筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞(阳性)多轮次的克隆化培养和抗体检测诱导融合诱导融合这个过程筛选了多少次？筛选的目的是什么？(第二次筛选)

2杂交瘤细胞(多种)13置于选择性培养基上培养第一次筛选融合的细胞BB132BB瘤瘤瘤瘤√二、单克隆抗体及其应用

克隆化培养抗体检测第二次筛选(抗原-抗体杂交技术)能分泌所需抗体的杂交瘤细胞阳性细胞杂交瘤细胞(多种)每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞96孔板阳性孔二、单克隆抗体及其应用

抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养单克隆抗体体内或体外培养注射到小鼠腹腔腹内培养相对于体外培养的优点：不需要特定的培养基，不需要严格控制环境条件。15二、单克隆抗体及其应用

特定抗原多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合多种融合细胞选择培养基进行筛选杂交瘤细胞抗体检测分泌所需抗体的杂交瘤细胞体外培养注射小鼠腹腔内增殖克隆化培养多次筛选单克隆抗体获取注射小鼠培养骨髓瘤细胞未融合细胞(第一次筛选)(第二次筛选)制备过程：二、单克隆抗体及其应用

【资料1】用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”。在妊娠第8天就可以作出诊断，这比原来的诊断方法提前了10d左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。具有准确、高效、简易、快速特点诊断优点：作为诊断试剂——最广泛的应用17抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体三、单克隆抗体的应用

【资料2】使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体-药物偶联物（antibody-drugconjugates,ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了