基因工程的基本程序资料.ppt

原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 点评：(1)基因表达载体也可以称为重组载体(如重组质粒)、重组DNA分子等。 (2)基因表达载体的构建不只是需要DNA连接酶，亦需限制酶参与。 (3)启动子与启始密码子、终止子与终止密码子的比较 启始(终止)密码子 启动(终止)子 本质 三个相邻碱基 DNA片段 位置 位于mRNA上 位于DNA上 作用 启动(终止)翻译 启动(终止)转录 ── ? ? ? ? ? ? 第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质； ? ? ? 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提 取出抗体（一抗）； ? ? ? 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； ? ? ? 第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上； ? ? ? 第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一 抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。 ? ? ? 由于这种抗原 — 抗体的结合显示不出条带 ， 所以加入一种称为二抗的抗 体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋 白质，则结果为阳性。 ? ? ? 具体做法是： 第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质； ? ? ? 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提 取出抗体（一抗）； ? ? ? 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； ? ? ? 第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上； ? ? ? 第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一 抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。 ? ? ? 由于这种抗原 — 抗体的结合显示不出条带 ， 所以加入一种称为二抗的抗 体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋 白质，则结果为阳性。 ? ? 第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质； 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提 取出抗体（一抗）； ? 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）； 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； ? 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； ? 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； 第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上； 第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。 由于这种抗原 — 抗体的结合显示不出条带 ， 所以加入一种称为二抗的抗 体， 由于这种抗原 — 抗体的结合显示不出条带 ， 由于这种抗原 — 抗体的结合显示不出条 由于这种抗原 — 抗体的结合显示不出条 由于这种抗原 — 抗体的结合 由于这种抗原--抗体的结合显示不出条带,所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。 思考？ 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 原理： 染色体的DNA Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上 农杆菌转化法中有二次拼接和二次导入。第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒上TDNA的中间部位，第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上；第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的TDNA进入受体细胞。 因为动物体细胞的全能性受到一定限制，故一般将目的基因