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首乌益智胶囊对血管性认知障碍的促血管新生作用和机制研究
提 要
目的:
1.观察首乌益智胶囊对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移、管状结构形成的影响,
及对 VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA 的影响,从而验证首乌益智胶囊是否能诱导
血管内皮细胞血管新生,并探讨其可能机制。
2.通过观察首乌益智胶囊对血管性认知障碍模型大鼠缺血脑组织微血管密度的
影响,探讨首乌益智胶囊促血管新生的疗效。
3.观察首乌益智胶囊对大鼠缺血脑组织 VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA 表达
的影响,探讨首乌益智胶囊促进具有稳定功能的血管新生的信号调控机制。
方法:
1.培养人脐静脉内皮细胞,随机分为空白对照组、尼莫地平组(尼莫地平含药血
清)、首乌益智胶囊组(首乌益智胶囊含药血清),分组用药,采用MTT法、划痕损伤
实验、管样结构生成实验等检测内皮细胞增殖、迁移和管样结构生成;采用实时定量
PCR检测HUVECs细胞VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表达。
2.以 Wistar 大鼠为实验对象,采用大脑中动脉缺血再灌注法建立血管性认知障
碍动物模型。将造模成功大鼠,随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组
(0.81mg/100g/d)、首乌益智胶囊组(54mg/100g/d),每组 20 只,造模后药物干预
4 周,Morris 水迷宫试验检测各组大鼠行为学改变,免疫组化检测 CD34 表达观察缺
血周围脑组织微血管密度的改变,电镜观察脑血管内皮细胞的超微结构变化,实时荧
光定量PCR检测缺血脑组织VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因表达。
结果:
1.离体实验结果
(1)首乌益智胶囊对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移、管状结构形成的影响:首
乌益智胶囊组OD 值为0.99±0.03 ,明显高于空白对照组的0.54±0.02 (p0.01) ;
首乌益智胶囊组迁移率为94.83% ,明显高于空白对照组的70.94 %(p0.01);高倍视
野(200×)随机计算6个视野下形成的管腔个数,首乌益智胶囊为23.42±2.83,明显
高于空白对照组的15.23±3.44 (p0.01)。
(2)首乌益智胶囊对人脐静脉内皮细胞VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影
响:空白对照组、尼莫地平组、首乌益智胶囊组的VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA
水平依次升高。与空白对照组比较,尼莫地平组和首乌益智胶囊组有显著性差异(p
0.01, p0.05);与尼莫地平组比较,首乌益智胶囊组Ang-1、Notch4mRNA表达有显
p0.05),首乌益智胶囊组VEGF、Tie-2mRNA表达无显著性差异 (p 0.05)。
著性差异 (
2.在体实验结果
(1)首乌益智胶囊对 VCI 模型大鼠学习记忆能力的影响:水迷宫结果表明,首
乌益智胶囊组大鼠的定位航行和空间探索实验测试成绩明显优于模型组和尼莫地平
组(p 0.01, p 0.05)。
(2)首乌益智胶囊对缺血周围脑组织微血管密度的影响:模型组、尼莫地平组、
首乌益智胶囊组较假手术组依次升高;各组与假手术组相比,有显著性差异(p 0.01,
p0.05);与模型组比较,尼莫地平组、首乌益智胶囊组有显著性差异(p0.01, p
0.05);与尼莫地平组比较,首乌益智胶囊组差异无显著性(p0.05)。
(3)首乌益智胶囊对 VCI 模型大鼠脑血管内皮细胞超微结构的影响:模型组缺
血侧微血管内皮细胞胞质以及毛细血管周围高度水肿,血管内皮细胞内线粒体数目减
少,线粒体的大部分嵴融合消失,部分核膜融合消失。首乌益智胶囊组和尼莫地平组:
镜下表现较模型组均有明显改善,毛细血管周围水肿较模型组轻,基膜基本正常,血
管内皮细胞可见较多的线粒体,已接近正常状态。以首乌益智胶囊组对内皮水肿改善
最为显著。
(4)首乌益智胶囊对VCI模型大鼠缺血脑组织VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA
的影响:模型组VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4、DLL4mRNA水平较假手术组大鼠升高,
差异有显著性(p0.05)。尼莫地平组和首乌益智胶囊组 VEGF、Ang-1、Tie-2、
Notch4mRNA 水平与模型组有明显升高(p0.01, p0.05);首乌益智胶囊组 VEGF、
Ang-1、Notch4mR
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