大观霉素的共振瑞利散射光谱及应用研究.doc

【标题】大观霉素的共振瑞利散射光谱及应用研究?? 【作者】陈 杰 【关键词】共振瑞利散射法??大观霉素??桔黄Ⅳ 【指导老师】庞向东 【专业】环境科学 【正文】1.引言??????大观霉素?(抗生素)（图1）,?名称(英) Spectinomycin,为链霉素Streptomyces spectabilis?所产生的一种由中性糖和氨基环醇一苷键结合而成的氨基环醇类抗生素。主要应用于淋球菌所引起的泌尿系感染，适用于对青霉素、四环素等耐药病例的重要药物,对治疗淋球菌引起的淋病有奇效。由于大观霉素毒性低,作为饲料添加剂和兽药广泛应用于兽医学领域。近年来的研究表明,大观霉素的药效与剂量密切相关,通过研究大观霉素对不同疾病的量效关系,找出其对不同疾病的最适剂量,必将能够扩大这类药物的临床应用,因此，对大观霉素药物进行分析研究，对临床上更好和更合理的使用大观霉素，具有极其深远的意义。药典上大观霉素的测定是利用杯碟法【1-2】（微生物法）进行,虽然此法灵敏度高，准确度好，但操作繁琐、费时，条件苛刻，不适用于半成品控制和急检需要。,此外,高效液相色谱(HPLC)法【3]、高效毛细管电泳法[4,5]、萃取光度法【6】、分光光度法[7,8]等也应用于大观霉素的测定，但普遍存在准确度不高、误差较大等缺点。共振瑞利散射法?( Resonance Rayleigh Scattering, RRS)?因其灵敏度高、?选择性好、?操作简便等特点而引起了人们广泛的兴趣和关注。近年来已被成功地应用于核酸、?蛋白质等生物大分子的痕量测定;对于药物分析【9- 12】, RRS法也显示出了良好的应用前景。2.实验部分2.1仪器和药品仪器：F-2500型荧光分光光度计（日本株式会社日立高新技术?那珂事业所）；pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。试剂：大观霉素(Spectinomycin，由长江师范学院分析测试中心提供)标准溶液：储备液浓度为1.0×10-3 mol/L；操作液浓度为1.0×10-4mol/L；桔黄Ⅳ（北京化工厂）溶液1.0×10-4mol/L；Tris-HCl溶液：用pH?计配成一系不同pH?值的缓冲溶液。标准品为生化试剂，其余试剂均为分析纯，试验用水为超纯水。2.2实验方法10mL比色管中按一定顺序加入一定量的 1.0×10-4mol/L SPM标准溶液， 3.0 mL 1.0×10-4mol/L桔黄Ⅳ溶液和0.4mL pH=9.63的Tris-HCl，用水定容，摇匀。在荧光分光光度计上以λex?=λem做同步扫描?,记录 RRS光谱，并在最大散射波长352nm处测定反应体系的 RRS强度IRRS及空白试剂的RRS强度I0。?3.结果与讨论3.1共振瑞利散射光谱图3为桔黄Ⅳ（结构以式见图2）与大观霉素体系的共振瑞利散射光谱，从图中可以看出，单独的大观霉素和桔黄Ⅳ的RRS均十分微弱，但是大观霉素与桔黄Ⅳ在有pH=9.63的Tris-HCl的参与下，相互作用形成离子缔合物后产生了强烈的RRS散射信号，其最大散射波长位于352nm，且I RRS与一定浓度范围的大观霉素呈良好的线性关系，本文选择用 352 nm波长进行实验。3.2?适宜的反应条件3.2.1 pH值的选择在波长λ=352nm，桔黄Ⅳ的加入量为1.0mL的条件下，分别试验了当Tris-HCl缓冲溶液 pH?= 3～11.12之间变化时?,体系IRRS强度的变化（图4），结果表明，pH=9.5～10.5时，实验体系的IRRS强度较高，实验用pH=9.63的Tris-HCl缓冲溶液。???3.2.2 Tris-HCl用量的选择?????实验考察了352 nm波长处Tris-HCl缓冲溶液（pH=9.63）用量对各体系IRRS的影响。实验表明,Tris-HCl缓冲溶液用量为0.3～0.5mL时体系的散射强度最大（图5），因此，本法取Tris-HCl缓冲溶液用量为0.3～0.5mL，实验用0.4mL Tris-HCl缓冲溶液。?3.2.3染料用量的选择在波长λ= 352 nm，Tris-HCl缓冲溶液pH=9.63，用量为0.4mL的条件下，实验了不同桔黄Ⅳ溶液用量对体系IRRS强度的影响。随着染料用量的增加，体系RRS强度先减小后增大，考虑到各试剂用量及比色管容量大小，本实验可选用桔黄Ⅳ溶液用量为2.5ml～3.5ml,?实验用3.0mL 1.0×10-4mol/L桔黄Ⅳ溶液（图6）3.2.4实验温度的选择　按照实验方法,固定其他条件,在波长λ= 352 nm处考察不同反应温度环境下（30°C、40°C、50