华石斛内生真菌诱导子对其组培苗生长的影响.

维普资讯 第27卷 第1期 热 带 作 物 学 报 V01．27 No．1 2006年 3月 CHINESE JOURNAL OFTROPICAL C Mar．20o6 华石斛 内生真菌诱导子对其组培苗生长的影响 吴智彪 ·宋希强 -， 李绍鹏 1华 南 热 带 农 业 大 学 园 艺 学 院 海南 儋州 571737 2中国科学院植物研究所系统与进化植物学重点实验室 北京 100093 摘 要 以12／MS为基本培养基，加入华石斛 内生菌根真菌的菌丝提取物，对华石斛无根小苗进行诱导培 养。结果表明：R5~R9号真菌诱导子均可不同程度地促进华石斛的生长，在 5种真菌诱导子中，R6的诱导效 果最好；R3和 R4对华石斛生长和分化无明显的促进效果。7种不 同菌株对华石斛组培苗 的促进作用依次 为 ：R6R8R_9R7R5R3R4。 关键词 真菌诱导子 华石斛 组织培养 中图分类号 $682，31 Q813，12 真菌诱导子 (fungalelicitor)是一类在植物超敏反应 中能引起植物细胞合成和积累次生产物 (植保 素)的活性物质。近年来的研究结果表明，利用微生物作诱导子可胁迫植物细胞培养物生长与合成和积 累刺激代谢物，为研究植物细胞生长和次生代谢的调控提供 了新手段 【卜6】。郭顺星等 7【】从野生细叶石斛种 子发芽的原球茎中分离出真菌，制成水提取液、醇提取液及其混合液；结果发现真菌提取液均对原球茎 的生长有促进作用 ，其中水提取液显著优于醇提取液，表明真菌提取液中含有促进细叶石斛原球茎生 长的营养物质。高微微等 。【】的研究也得到类似的结果，小菇属开唇兰小菇、石斛小菇和兰小菇 3种真菌 诱导子均能促进铁皮石斛幼苗生长，促进金线莲侧芽及侧根的萌发。潘超美[91自野生建兰和墨兰根 中分 离得 4号不同的菌株，其真菌诱导子对铁皮石斛组织培养物的生长均有不同程度地促进。但关于由野 生兰科植物根系中分离得到共生真菌，其 内生真菌诱导子对该种兰科植物组培苗的生长影响之研究鲜 见报道。华石斛 (Dendrobiumsinense)为多年生附生兰科植物，海南特有种，自然繁殖率很低、生长缓慢。 笔者根据在 自然界中真菌与兰科植物共生及长期形成的营养平衡关系，通过组织培养的方法，利用真 菌诱导子促进华石斛幼苗的生长和分化，旨在探索一条简便可行的快速繁殖华石斛组培苗的新途径。 1 材料与方法 1-l 材 料 华石斛蒴果采于海南霸王岭国家 自然保护区，种子通过无菌培养诱导、分化形成无根小苗，苗高 0．5cm；选择生长旺盛且长势基本一致者为外植体。7种兰科 内生菌根真菌均为从华石斛野生植株根系 中分离，经纯化培养后获得，编号为 R3～R9。 1．2 真菌菌株的复壮及诱导子制备 菌株在改 良的PDA培养基 (土豆200g／L+卡拉胶 10g／L+糖20g／L，pH5．6)上活化复壮后，将菌 丝体转移到上述不含琼脂的液体培养基 中；自然光照条件 ，25℃下，摇床 (100~120r／rain)振荡培养 2周 。 待菌丝体充分生长后收获，过滤菌丝体，将菌丝体置研钵中充分研碎后与滤液合并，菌液 120℃灭菌后 备用 。 1．3 培养基与培养方法 以1／2MS+蛋 白胨 1g／L+蔗糖 20g／L+卡拉胶 8．5g／L为基本培养基，设置分别加入香蕉 70g／L、 R3~R9菌液 50mL／L和不加菌液作对照R1等 9个处理，分别对应的培养基为 I ，R3，R4，R5，R6，R7， 华南热带农业大学院校科技基金 (Rnd0012)资助 吴智彪 男，1969年生，讲师 。研究方向：观赏园艺。电话：0898 通讯作者，E一~mail：song．strong@|63．coln 收稿 日期：2005—08—30 修回 日期：2006一Ol一10 维普资讯 热 带 作 物 学 报