耐酸性和耐高浓度CO2 的海洋微藻筛选[J].docVIP

耐酸性和耐高浓度CO2的海洋微藻筛选 孟范平，谢爽，于腾，李永富，王佳桢，付晓刚 中国海洋大学海洋环境与生态教育部重点实验室，山东 青岛 266100 摘 要：用于固定工业烟道气CO2的微藻必须具有耐酸性和耐高浓度CO2的能力。本研究拟从12种常见海洋微藻中筛选出耐酸和耐高浓度CO2的种类。首先采用微板吸光法测定了微藻在不同pH值的F/2培养基中的藻细胞密度变化，比较了各种微藻对H2SO4和HNO3所致酸性的适应能力；将耐酸性较强的微藻接种到培养基中，以75 m/min的流量连续通入体积分数为5%的CO2，并以通入空气的培养基中生长的微藻为对照，根据培养7d期间藻细胞密度和生物量的变化趋势，进一步筛选得到耐受高浓度CO2的藻种。结果表明，12种供试微藻中，以杜氏盐藻（Dunaliella tertiolecta）、钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)、海水小球藻（Chlorella pacifica）和小新月菱形藻（Nitzschia Closterium）的耐酸性较强，均可在pH=4的培养基中正常生长；而小新月菱形藻和海水小球藻同时能够耐受高浓度CO2冲击，培养结束后，5%CO2处理组的藻生物量分别达到对照组的107.62%和113.43%。因此，小新月菱形藻和海水小球藻在固定工业CO2和减缓温室效应方面具有较好的应用潜力。 关键词：海洋微藻；耐受性；酸；高浓度CO2 工业烟道气是一种长期稳定的CO2集中排放源[1]。以工业烟道气替代纯净CO2作为微藻生长的碳源，将大大降低微藻生产成本，同时能够降低烟道气CO2的排放量，对于减缓温室效应和控制全球变暖具有重要意义。但是，来自石油和化工行业的工业废气中，除了含有高浓度CO2气体（1530%）外，SOx、NOx等酸性气体的浓度也很高，可达到285855 mg/m3[2]。已有研究报道，当环境中CO2大于5%时，大部分微藻的生长将受到抑制，影响固碳效率[3]；而通入SOx、NOx等气体则导致培养体系的pH值降低，也会抑制微藻生长和降低固碳效率。因此，固定CO2的微藻应具有一定耐酸性和耐高浓度CO2能力。 本研究首先采用H2SO4和HNO3调节微藻培养基的pH值，以模拟工业废气（SOx和NOx）通入后微藻培养体系酸性增大或pH降低的状况，然后接种12种常见海洋微藻，分别测定指数生长期的藻细胞密度（以光密度OD690表征），并与对照组（pH=8）的测定结果进行比较；在此基础上，将耐酸性较强的微藻接种于F/2培养基中，连续通入体积为5%的CO2，同时以在一般空气中培养的微藻为对照，进一步分析和比较微藻的藻细胞密度和生物量与对照组的差异，由此筛选得到既有较强耐酸性又能在高浓度CO2中生长的微藻，以便为工业废气CO2高效固定提供性能优良的藻种。 1 材料、仪器与方法 1.1 材料 微藻：12种，分别由中国科学院海洋研究所和中国海洋大学微藻种质库提供，其中绿藻5种海水小球藻（Chlorella pacifica）、亚心形扁藻（Platymonas subcordiformis）、青岛大扁藻（Platymonas helgolandica Var. tsingtaoensis Tseng et T.J.Chang）、杜氏盐藻（Dunaliella tertiolecta）、微绿球藻（Nannochloris oculata）。硅藻4种：纤细角毛藻（Chaetoceros gracilis）、牟氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）、小新月菱形藻（Nitzschia Closterium）、小角毛藻（Chaetoceros minutissimus）。金藻2种：球等鞭金藻（Isochrysis galbana）、绿色巴夫藻（Pavlova viridis）。蓝藻1种：钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)。 培养基：所有微藻均采用F/2培养基，配制方法同文献[4]，主要成分为NaNO374.8 mg/L，NaH2PO44.4 mg/L，以及少量的维生素和微量元素。进行微藻耐酸性检验时，分别用H2SO4溶液（0.1和1 mol/L）或HNO3溶液（0.2和2 mol/L）将此培养基调节pH值为2～8。 海水：取自青岛石老人近岸海域，黑暗沉淀24 h后经0.45 μm滤膜抽滤后，煮沸消毒，冷却备用。 微藻预培养：将每种微藻接种到装有100 m的2/F培养基的三角瓶中，放入光照培养箱中，在温度25 ℃、光照强度约4000lx、光照时间24 h/d的条件下培养，每天摇瓶3次，培养23 d至指数生长期。 CO2气体：青岛市瑞丰气体有限公司生产。为5%，装于40 L高压钢瓶内。 1.2 仪器 RT6000型酶标仪（带690 nm滤光片，深圳雷杜仪器有限公司