补血草金属硫蛋白.docVIP

【摘要】： 补血草是一种耐干旱和盐碱的植物，含有的化学成分十分复杂，其中包括金属硫蛋白。金属硫蛋白是由微生物和植物产生的金属结合蛋白，富含半胱氨酸的短肽，对多种重金属有高度亲和性。它是分子质量较低，半胱氨酸残基和金属含量极高的蛋白质。与其结合的金属主要是镉、铜和锌，广泛地存在于从微生物到人类各种生物中，其结构高度保守。Limonium,a plant resistant to drought and salinity,has many special genes related with the response to drought and salinity, including the metallothionein . Metallothionein produced by microorganisms and plant metal-binding protein, cysteine-rich peptides, has high affinity for heavy metals. It is a low molecular weight, cysteine residues and high metal content of the protein. Combined with the metal is mainly cadmium, copper and zinc, widely present in various organisms from microbes to humans, its highly conserved structure. In this experiment,metallothionein gene MT16, MT42, MT82 from Limonium sinense was cloned and used to constructMT:: PGEX4T-1 fusion-expression vector .and then, fusion-expression vector was imported into Escherichia coli BL21, and used to observe the growth conditions on medium containing heavy metals to study gene function. key words： Limonium metallothionein PGEX4T-1 fusion-expression vector 目录 【摘要】： 1 【关键词】： 1 Abstract 2 key words： 2 目录 3 1简介 4 1.1 补血草简介 4 1.1.1补血草植物资源介绍 4 1.1.2补血草属植物化学成分 4 1.1.3补血草属植物资源药用价值 5 1.2 金属硫蛋白简介 5 1.2.1金属硫蛋白定义 5 1.2.2 植物金属硫蛋白的基本功能 5 1.2.3植物金属硫蛋白的特性 6 1.2.4. 植物MT分类 6 1.2.5植物金属硫蛋白的应用前景 7 2 实验材料与方法 7 2.1 实验仪器、材料和试剂 7 2.1.1 实验仪器 7 2.1.2 实验材料 8 2.1.3 试剂 8 2.2 实验步骤 10 2.2.1植物材料的处理 10 2.2.2补血草总RNA的提取 10 2.2.3 反转录 10 2.2.4 PCR扩增目的基因 11 2.2.5 目的片段连接到T载体上 12 2.2.6 大肠杆菌超级感受态细胞的制备 12 2.2.7 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 13 2.2.8 碱裂解法提取质粒 13 2.2.9 质粒酶切检测 13 2.2.10 将检测有目的片段的重组质粒送测序公司测序 14 2.2.11 目的片段回收 18 2.2.12 将测序正确的目的片段导入表达载体PGEX4T-1 18 2.2.13将连接了目的基因的PGEX4T-1载体转入DH5a大肠杆菌 19 2.2.14 将连接产物转化到BL21大肠杆菌感受态细胞中 19 2.2.15 保菌、提取质粒 19 2.2.16将质粒酶切检测目的片段 19 2.2.17 将保存的菌种划板纯化 20 2.2.18细菌扩增后在含有重金属盐离子的平板上点菌 20 3. 实验结果与讨论 21 3.1 补血草总RNA提取结果 21 3.2 PCR产物分析 21 3.3 连接T载体后从大肠杆菌中提取的质粒电泳图 22 3.4 连接T载体后提取质粒酶切电泳检测图 24 3.5 导入BL21大肠杆菌中提取质粒电泳图 25 3.6 连接PGEX4T-1后质粒酶切产物验证图 25 3.7细菌扩增后在含有重金属盐离子的平板上点菌结