运动生物化学试验指导.docVIP

实验一??? 实验基本技术操作 一、实验目的 （一）了解实验室规则及注意事项。 （二）学习运动生物化学实验常用仪器的使用及清洗方法。 （三）学习721型分光光度计的使用方法。 二、实验原理 运动生物化学是研究人体运动时体内的化学变化。运动生物化学的实验方法基本上是化学的方法，用定量及定性的分析方法来观察机体内物质代谢的规律，所以实验时必须做到定性的洁净及定量的精确，因此实验取样要准确、样品要无污染。 对于相同物质和相同波长的单色光来说，溶液的光密度和溶液的浓度呈正比。配制各种浓度的CuSO4溶液，然后在780nm波长下比色，测定各种浓度的CuSO4溶液吸光度值，并制作曲线图。 三、实验器材 试管、CuSO4溶液、蒸馏水、721分光光度计、移液管、吸耳球等。 四、实验步骤 （一）玻璃仪器的清洗。 （二）使用移液管的移液操作及721分光光度计的使用。 取4支大试管，编号，按表7-1进行操作： 表7-1? CuSO4溶液的测定 ? 空白管 试管1 试管2 试管3 CuSO4溶液(ml) 0 1.0 2.0 3.0 蒸馏水(ml) 4.0 3.0 2.0 1.0 充分混匀后，以空白管调零，780nm波长比色 以CuSO4溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，将3种不同浓度的CuSO4溶液的光密度值分别点在坐标纸上，通过3点绘制成曲线图，并对实验结果进行分析。 五、注意事项 （一）玻璃仪器清洗后注意检查，管壁不能留有水珠。 （二）使用移液管吸取液体时一定要缓慢平稳，不要太快、太猛。 六、作业与思考 （一）玻璃仪器的清洗有哪些基本要求？ ? ? 实验二??? 血红蛋白的测定 血红蛋白（Hb）是红细胞中的一种重要蛋白质，1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。 Hb的主要生理功能是运输氧气（O2）、二氧化碳（CO2）和对酸性物质（H+）起缓冲作用，参与体内的酸碱平衡调节。运动时机体需氧增加，故血红蛋白增加，有利于为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走CO2，而且也能起中和酸性的作用。如果血红蛋白下降，氧供应减少，影响运动能力。 运动员安静时血红蛋白值与正常人没有明显差异。一般人Hb的正常值男性为120-160g/L；女性110-150g/L。临床上常用判断贫血的标准，即成年男性低于120 g/L；成年女性低于110 g/L；而14岁以下的少年、儿童，不论男女，均以低于120 g/L作为贫血。 血红蛋白的含量与运动员的身体机能状态、训练水平、运动负荷等关系密切，因此血红蛋白的含量高低直接影响运动员的身体机能和运动能力，尤其对耐力运动员的专项素质能力。运动员在大运动量开始时，血红蛋白浓度出现明显下降，经过一段时间训练后，运动员身体机能逐渐适应大运动量训练，血红蛋白逐渐回升。若训练一个阶段后Hb水平仍未回升或还有继续下降的趋势，应及时注意调整运动量，并加强营养补充。因此，定期测定Hb的含量，有助于了解运动员的对负荷的适应、身体机能水平及营养状态等情况。 一、实验目的 （一）学习取微量血的方法及血样的处理。 （二）掌握血红蛋白的测定方法。 （三）掌握运动训练中血红蛋白指标应用的评价及价值。 （四）巩固721分光光度计的使用方法。 二、实验原理（高铁氰化钾法） 血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子结合成棕红色氰化高铁血红蛋白。氰化高铁血红蛋白在540nm处有一个吸收峰，通过比色可以测定其光密度值，从而计算出血红蛋白浓度。 氰化高铁血红蛋白测定法是国际血液学标准化学委员会确定的检测血红蛋白含量的标准方法。 三、实验器材 （一）氰化高铁血红蛋白稀释液：高铁氰化钾0.2g、氰化钾0.05g、磷酸二氢钾0.12g，用蒸馏水溶解并稀释至1000ml，置于棕色瓶中，瓶口塞紧后保存于冷暗处或冰箱，注意不能冷冻，至少可稳定1个月。 （二）氰化高铁血红蛋白标准液：（试剂盒）。 （三）95%酒精、75%酒精。 （四）一次性采血针、吸血管、棉球、试管、移液管、吸耳球、721分光光度计等。 四、实验步骤 ? ?取3支大试管编号，按表7-2进行操作。 ? ? 表7-2? 血红蛋白的测定 ? 空白管 标准管 测定管 氰化高铁血红蛋白稀释液(ml) 5.0 5.0 5.0 新鲜手指血 (ml) — — 0.02 氰化高铁血红蛋白标准液(ml) — 0.02 — 充分混匀后，放置3min，以空白管调零， 在540nm波长处比色，读取测定管及标准管光密度OD值 对实验结果进行计算，并分析讨论。 ?? 血红蛋白（g%）＝OD测／OD标×C标 五、注意事项 （一）试剂含有氰化物，为剧毒药品，配制和保存时必须严格注意安全。实验后一定要洗手，并注意药品的处理，不能乱倒。 （二）取血部位对血红蛋白测定结果有很大影响，最好取手指血测