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以柑桔皮为原料用宇佐美曲霉生产饲用复合酶的研究 戚炯炯，张嘉，单丽君, 叶兴乾， 郑晓冬* （浙江大学生物系统工程与食品科学学院 食品科学与营养系，杭州 310029） 摘 要：本文以实验室筛选的一株可同时产纤维素酶、木聚糖酶和酸性蛋白酶的宇佐美曲霉 A.usamii-CF1 为生产菌株，以柑橘皮为原料，对固体发酵培养基的水分含量、起始pH、碳源、 无机盐及柑桔皮粉与豆粕比例对产酶率的影响进行了研究，发现当培养基配方为：桔皮粉 53%， 豆粕 23%，麸皮 19%，尿素 1%，Na HPO 2%，MnSO4 2%；最佳培养基水分为 55%-60%时菌种产酶 2 4 活力达到：CMC酶 41.6U/g，β-葡萄糖苷酶 102.2U/g，木聚糖酶 2079.6U/g，酸性蛋白酶 7884.6U/g。经干燥后的复合酶储存性能稳定。 关键词：A.usamii-CF1 柑橘皮 固体发酵 复合酶 0 引言 我国是柑橘生产大国，浙江省又是全国最大柑橘罐头出口省份之一，每年都会产生大量的 副产物——柑橘皮。柑橘皮富含果胶、纤维素、可溶性糖及多种矿物质元素，是一种良好的微 生物生长基质。目前对柑橘皮的研究主要集中在内含成分的提取，对利用微生物发酵柑橘皮生 产酶制剂的报道较少，吴厚玖[1] [2] 等开展了柑橘皮渣发酵饲料中间试验研究，Ismail 对微生物液 体发酵柑橘皮产酶进行研究。用柑橘皮为原料固体发酵生产复合酶制剂国内外未见报道。本实 验旨在研究酶系较全、产酶水平较高的宇佐美曲霉A.usamii-CF1 利用柑橘皮进行固体发酵产酶 的最佳条件。 1 材料与方法[3] 1．1 材料 菌种: 实验室选育菌株 A.usamii-CF1 培养基: 斜面培养基（PDA 培养基）：20%土豆汁，2%葡萄糖，1.8%琼脂。固体基础发酵培养 基（简称基础培养基）：干燥桔皮粉 4g，豆粕 1g，尿素 0.1g，水 10ml，自然 pH。 试剂: DNS试剂、0.1M醋酸-醋酸钠缓冲液（pH 4.8）、0.1M pH3.0 乳酸-乳酸钠缓冲液、福 林试剂(Folin试剂)、0.4M碳酸钠溶液、0.4M三氯乙酸溶液、2%酪蛋白溶液（pH3.0）、100μg/mL 酪氨酸溶液 1．2 方法 1．2．1 固体发酵方法 在 250mL三角瓶中，装入固体发酵培养基，搅拌均匀，121 ℃灭菌 20min，冷却后接入 1mL 浓度为 107个/mL的孢子悬浮液，置于 28℃生化培养箱中发酵培养 60h，测定各种酶活。 基金项目：浙江省重大招标项目 作者简介：戚炯炯， 1982，女，硕士研究生，主要从事酶制剂生产研究 1．2．2 酶的抽提 取一定量的发酵固体，加入 10 倍发酵固体量的蒸馏水，间歇搅拌 1.5h，一层滤纸过滤得粗 酶液，用蒸馏水稀释作酶测定用。 1．2．3 酶活测定方法 纤维素酶（CMC 酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶（FPA））测定采用 DNS 法[4]。酶活定义：在 pH4.8，50℃条件下，每分钟水解各底物产生 1µmol 葡萄糖所需的酶量为一个酶活单位(U)。 酸性蛋白酶活力测定采用福林酚法[5]。酶活定义为：在 40℃下每分钟水解酪蛋白产生 1μg 酪氨酸的酶量,定义为1个蛋白酶活力单位（U）。 木聚糖酶的活性测定见文献[6]。酶活定义为：在 pH4.8，50℃的测定条件下，每分钟产生 1µmol 木糖的酶量作为一个单位（U）。 2 结果与分析 2．1 培养基水分含量对产酶的影响 30 a 7 140