草鱼GSTR基因外显子1、外显子2的SNPs筛选及其与生长性状的关联分析.pdfVIP

第 3O卷 第6期 华 中 农 业 大 学 学 报 V0l_30 No．6 2011年 12月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Dee．2011，753~ 758 草鱼 GSTR基 因外显子 1、外显子 2的 SNPs 筛选及其与生长性状的关联分析 刘小献 白俊杰 徐 磊。 于凌云 樊佳佳 韩林强。 1．中国水产科学研究院珠江水产研 究所 ／ 中国水产科学研究院热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室，广州 510380； 2．大连海洋大学生命科学与技术学院，大连 116023；3．上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306 摘要 根据草鱼EST数据库中的rho型谷胱甘肽硫转移酶基因 eDNA序列设计引物，扩增预计存在的 SNP位点。采用PCR产物测序法和PCR-RFLP法，在珠江水系草鱼养殖群体 中筛选到2个SNP位点，分别位 于外显子 1和外显子 2上，为GT突变，且属于同义突变，统计了多态位点在群体中的分布 ：C+129T位点 CC 型占0．69 ，TC型占8．75 ，TT型占8O．56 ；C+192T位点 CC型占25．4 ，TC型占48．6 ，TT型占 26．1 。利用一般线性模型将SNPs与草鱼 6个生长性状进行关联分析，结果表明，C+129T位点TT型个体 6 个生长性状均值比TC型高 (P0．05)；C+192T位点 TT型个体体质量均值 高于 TC型和 CC型个体 (PO．05)。双倍型关联分析表明D1型个体的体质量均值明显高于D3型和D6型(PO．05)，因而可以考虑将 GSTR基因作为影响草鱼体质量等生长性状的候选基因，应用于草鱼分子辅助育种。 关键词 草鱼；SNPs；谷胱甘肽硫转移酶；rho型谷胱甘肽硫转移酶基因；多态性；生长 中图分类号 Q959．46 8 文献标识码 A 文章编号 1000-2421(2011)06-0753—06 草鱼 (Ctenopharyngodonidellus)具有生长快、 囊藻毒素解毒过程中有重要作用。对金鱼(Caras— 肉质鲜美和养殖成本低等优点，是我国淡水渔业中 siusauratus)GSTR基因研究发现，其转录水平 的 最重要的养殖品种之一。由于草鱼性成熟周期长， 变动会增加金鱼的健康风险[8]。目前有近 20种鱼 亲鱼个体大等原因，给 良种选育带来困难，目前草鱼 的GS豫 基因成功克隆，但有关GSTR基因多态性 尚未获得遗传改良的品系。利用DNA遗传标记进 对鱼类生长影响的研究尚未见报道。笔者研究了草 行辅助选育 已经成为动物育种过程 中的重要方 鱼GS豫 基因上的SNPs对生长性状的影响，以期 法_1]。筛选和利用与草鱼经济性状相关的分子标 为草鱼分子标记辅助育种奠定基础。 记 ，可有效提高选择效率，缩短育种年限，对加快培 1 材料与方法 育具有优 良经济性状的草鱼养殖品系，具有重要的 意义。SNPs作为第4代分子遗传标记 以其优 良特 1．1 供试鱼及材料 性在动植物育种 中被广泛应用L2]，但 目前国内对经 供试草鱼取 自广东省佛山市三水白金水产种苗 济动物 SNPs的研究主要集 中在畜禽类动物 中，在 有限公司，亲本来源于珠江水系。为同批繁殖和同 水产动物研究中涉及较少，与其他分子标记相比， 池养殖 2O月龄的草鱼群体，体质量为 (1292．5I- SNPs分辨率高，覆盖基因组范围大，遗传稳定，以 342．3)go均采用尾静脉活体取血，抗凝剂(ACD)与 有“或无”的形式存在，利于发展 自动化分析。 血液体积比为6：1，采用天根生化科技 (北京)有限 谷胱甘肽硫转移酶 (gluthioneS-transferase， 公司(TIANGEN)血液基因组提取试剂盒提取鱼血 GST)是一种广泛存在于生物组织中的小分子水溶 液DNA，所有DNA样本均放于一20℃保存 。 性蛋 白，具有解毒 ]、抑制脂质过氧化作用[。]。 TaqDNA聚合酶，buff