NIRF对HBV复制的影响及其对组蛋白H3.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(3): 322–327 NIRF对HBV复制的影响及其对组蛋白H3 乙酰化水平的修饰 1 1 1 1,2* 周丹琳 胡 斌 宣艳艳 段昌柱 1 ( 重庆医科大学细胞生物学遗传学教研室, 重庆 400016; 2重庆医科大学临床检验诊断中心教育部重点实验室, 重庆 400016) 摘要 为研究NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)的复制以及与乙型肝炎病毒共价环状闭合DNA(HBV cccDNA)结合的组蛋白H3 乙酰化的影 响, 采用脂质体转染将pGEM-HBV1.3+pFLAG 、pGEM-HBV1.3+pFLAG-NIRF 、pGEM-HBV1.3 质粒分别转入HepG2 细胞, Western blot检测NIRF蛋白的表达, 用ELISA结合RT-PCR检测HBsAg 、 HBeAg 以及HBV cccDNA的量并同时说明HBV在细胞内是完成完整复制表达的, 采用染色质免疫 共沉淀(ChIP)的方法检测与HBV cccDNA结合的组蛋白H3 以及H3 乙酰化水平的动态变化。结果 显示, NIRF蛋白下调HBV标志物HBeAg 、HBsAg的分泌以及HBV cccDNA的表达, 表明其对HBV 复制具有抑制作用; 组蛋白H3及乙酰化的组蛋白H3都与HBV cccDNA的动态变化水平呈现相似的 平行性, 而NIRF蛋白也明显抑制组蛋白H3的表达水平和乙酰化水平。结论证实NIRF 不仅能抑制 HBV在肝癌细胞中的复制, 而且能下调与HBV cccDNA结合的组蛋白H3和乙酰化组蛋白H3的表 达。期待NIRF 能为后续的HBV致病机理、HBV复制表观遗传学水平研究及有效抗病毒药物的研 究与开发提供理论上的支持与帮助。 关键词 乙型肝炎病毒; NIRF; 组蛋白H3; 乙酰化 The Effect of NIRF on the Acetylation Status of HBV cccDNA Bound-H3 in HepG2 Cells 1 1 1 1,2* Zhou Danlin , Hu Bin , Xuan Yanyan , Duan Changzhu 1 2 ( Department of Cell Biology and Medical Genetics, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China ; Key Laboratory of Clinical Laboratory Diagnostics of Ministry of Education, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China) Abstract To determine the effect of NIRF protein (Np95/ICBP-90 like RING finger protein) on the rep