水稻osvdac基因RNAi表达载体的构建及遗传转化.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2011，39(28)：17176—17178 责任编辑 刘月娟 责任校对 卢瑶 水稻 osvdac基因RNAi表达载体 的构建及遗传转化 江晨，程钢，刘学群，谭艳平，周杰，王春台 (中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室，湖北武汉 430074) 摘要 [目的]构建水稻osvdae3和osvdac5基因RNA干涉表达载体，获得转干涉载体的转基因水稻植株。[方法]采用TRIzol法提取水 稻幼苗总RNA，以反转录的cDNA为模板 ，扩增得到osvdac3和 osvw5的分别靠近5’端和 3’端约 500～6OObp的特异序列，用Gateway 重组克隆技术构建RNA干涉表达栽体，采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行遗传转化。f结果]成功构建水稻2个osvdac3和2个∞一 vdac5基因RNA干涉表达载体，并获得转osvdac3干涉载体的阳性植株。[结论]干涉㈣dac3和osvdac5的植株为研究其功能提供材料。 关键词 水稻 ；osvdae基因：RNA干涉；Gateway技术 中图分类号 s5ll 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2011)28—17176—03 Construction andGeneticTransformationofRNAiExpressionVectorofosvdacGenesinRice JIANG Chenetal (KeyLabforBioteehnologyofStateEthnicAffairsCommission．CollegeofLifeScience，South—CentralUniversityforNa— tionalities，Wuhan，Hubei430074) Abstract [ObjectiveJTheresearchaimedtoconstructtheRNAiexpressionvectorsofosvdac3andosvdae5gene．andtoobtaintransgenic plantswiththeRNAjvectors．1MethodJThetotalRNAwasextractedfromriceseedlingswithTRIzolandreversetranseriptedtocDNA．4spe— cialfragmentsabout500—600bpnearby5’and3’ofosvdac3andosvdac5genewereamplifiedwiththeeDNA template．Thegatewayreeom． binationcloningtechnologywasusedtoconstructtheRNAiexprefssionvectorofr4fiagments．Th erecombinantRNAiexpressionvectorplas— midsweretransformedintothecallusthroughagrobaeterium—mediatedapproach．『Resultl4RNAiexpressionvectorsoftheosvdac3andOSV— dae5genewereconstructedsuccessfully．AndtheseRNAiexpressionvectorswere introducedintoricevarietyYuetaiB．andsometransgenic plantswereobtained．1Conclusion{田letransgenicplantswithRNAiforosvdac3andogyd~c5providedthematerea1ofrstudyingtheirfunction． Keywords Rice(Oryzasativa)：osvdac；RNA interference：Gatewayrecombinationelmfingtechnology 电压依赖性阴离子通道 (Voltage—dependentanionchan— 时问、经费和精力。笔者利用Gateway重组克隆技术体系，利 nel，VDAC)作为线粒体外膜上的一个组件 ，广泛存在于从真 用实验室前期已鉴定的8个水稻 vdac基因中的osvdac3和 菌到动植物的生物体中。在真菌和植物的线粒体外膜上， osvdac5，构建各基因RNA干涉表达载体并进行遗传转化，通 VDAC是含量最丰富的蛋白…。植物 VD