提纯鸡卵黄免疫球蛋白IgY方法研究.pdfVIP

第３７卷　第２期 贵 阳 医 学 院 学 报 Ｖｏｌ．３７　Ｎｏ．２ ２０１２年４月 　　　 　　　 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＩＹＡＮＧＭＥＤＩＣＡＬＣＯＬＬＥＧＥ ２０１２４ ·技术与方法 ·  提纯鸡卵黄免疫球蛋白ＩｇＹ方法的研究  谢国文，张永宏 ，许春杏，杨　杰，张维森，张　健 （贵阳医学院附院消化科，贵州 贵阳　５５０００４） ［摘　要］目的：优化抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白ＩｇＹ提取方法。方法：比较硫酸铵盐和饱和硫酸铵２种方 法对卵黄除脂效果的影响，并采用ＳＤＳＰＡＧＥ对提取产物进行鉴定。结果：ｐＨ５１水稀释法加盐析法（两步硫酸 铵法）除脂效果相对较好，获得ＩｇＹ纯度及得率均较高。结论：水溶稀释法加盐析法（两步硫酸铵法）制备ｌｇＹ 具有纯度高、得率高、特异性强及利用小体积样品获得大量纯化蛋白的优点。 ［关键词］免疫球蛋白类；蛋黄蛋白质类；鸡 ［中图分类号］Ｒ３４１．１　　［文献标识码］Ｂ　　［文章编号］１０００２７０７（２０１２）０２０２１１０２ 　　近年来，将含有特异性ＩｇＹ的免疫鸡蛋口服用 提供。 于防治轮状病毒腹泻、脊髓灰质炎、甲型肝炎和其 １２　ＩｇＹ提取与纯化 ［１］ 它肠道感染性疾病并取得满意效果 ，亦有口服 １２１　两步硫酸铵提取方法　取消毒完毕的鸡蛋 特异性ＩｇＹ鸡蛋产品替代抗生素成功治疗胃肠道 １个，用剪刀打开一个小洞，让蛋清缓缓流出至不 ［２］ 疾病的报道 。鸡卵黄抗体（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｏｆ 能再流出后，再以无菌生理盐水洗净卵清，将整个 ｅｇｇｙｏｌｋ，ＩｇＹ）是由母鸡血液中ＩｇＧ转移至其卵黄 卵黄小心移至滤纸上，来回滚动，除尽蛋清。再用 ［３］ 中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白 。免疫 针头刺破蛋黄，使之移到量筒。量取约８ｍｌ蛋黄 鸡蛋黄中含有大量来源于血清的 ＩｇＧ抗体（即 液，加 １０倍双蒸水稀释卵黄，混匀后调 ｐＨ值为 ＩｇＹ），浓度远高于血清，维持时间长达２８周，具有 ５１，－２０℃过夜，室温解冻，１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离 高度稳定性和生物学活性，这使鸡卵黄抗体ＩｇＹ口 心３０ｍｉｎ，再将上清液用滤纸过滤除脂，获得较清 服防病治病成为可能，目前国内外已有较多关于怎 上清液。上清液加入硫酸铵晶体，使其浓度为 样从鸡蛋黄中提取 ［４，５］ ＩｇＹ的报道 ，但存在诸如实 １９％，静置１ｈ后，再次以１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心 验步骤繁琐不易操作、ＩｇＹ提取的纯度与得率均较 １５ｍｉｎ，取其白色沉淀。将白色沉淀溶于 １５ｍｌ 低等缺点。本实验意在寻求一种相对简单、实用、 ００１ｍｏｌ／ＬｐＨ７４ＰＢＳ中，再加入硫酸铵晶体，使 纯度与得率均较高的提取鸡卵黄免疫球蛋白ＩｇＹ 其浓度为１４％，再次静置１ｈ后，再次以１２０００ｒ／ｍｉｎ 方法，为大规模制备口服抗幽门螺旋杆菌ＩｇＹ抗体 ４℃离心 １５ｍｉｎ，取其白色沉淀，溶于００１ｍｏｌ／Ｌ 治疗胃肠道疾病实验提供资料。