阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgricuhuraeZhejiangensis，2012，24(6)：1040—1044 http：／／www．zjnyxb．cn 吴智艳，叶静云，程珊，等．阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究[J]．浙江农业学报，2012，24(6)：1400—1044． 阿魏侧耳菌丝体 RNA提取方法的比较与研究 吴智艳，叶静云，程 珊，闫训友 (廊坊师范学院 生命科学学院，河北廊坊065000) 摘 要 ：采用一步法、异硫氰酸胍一巯基乙醇联合变性法和STE法3种方法 ，分别对阿魏侧耳总RNA的提取 效果进行比较。结果表明，一步法难以提取RNA，异硫氰酸胍一巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想 ， 存在蛋白污染 这2种方法不适于富含多糖的阿魏侧耳总RNA的提取；STE法提取阿魏侧耳总 RNA质量高 、 完整性好、成功率高，经琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测，提取的总RNA具有清晰的28S，18S，5S三条 带 ，且28S的亮度是 18S的2倍左右，OD26o／OD：。比值为 1．8—2．0，可作为阿魏侧耳总 RNA提取的首选方 法。用此方法来提取阿魏侧耳液体发酵不同时期的RNA，可以满足进一步分子生物学研究的要求。 关键词：阿魏侧耳；RNA提取；STE法 中图分类号：S646 文献标志码 ：A 文章编号：1040—1524(2012)06—1400-05 ComparisonoftheRNAisolationmethodsforPleurotusferulaeLenzihyphostroma WUZhi—yan，YEJing—yun，CHENGShan，YANXun—you (CollegeofLifeScience，LangfangTeachemCollege，Lanffang065000，China) ． Abstract：TotalRNAofPleurotusferulaeLenziwasextractedbysingle—stepmethod，STEmethodandguanidinium isothiocyanatemethod，whoseisolationeffectswerecompared．Theresuhsshowedthatitwasdifficulttoextracttotal RNAfromPleurotusferulaeLenzibysingle—stepmethod．TotalRNAcouldbeextractedbyguanidiniumisothiocya— natemethod，butRNA extractedwasimmingledbysomeproteinandwasnotenoughformolecularbiologyexperi· ment．Single—stepmethodandguanidiniuisothiocyanatemethodwerenotsuitableforRNA extractionfrom Pleurotus ferulaeLenzibecauseofitshi．ghamylasecontent．TotalRNAextractedbySTEmethodhadhighquality，whichisthe bestmethodoftotalRNAisolationfromPleurotusferulaeLenzi．ThequalityoftotalRNAwasanalyzedwithagarose gelelectrophoresisandnucleicacidandultravioletspectrophotometer．Threebrightbna dswereobservedinagarose gelelectrophoresisas28S，18Sand5S．Thebandof28Swastwicewiderthanthatof18S，andthevalueofOD26o／ OD280was1．8to2．0．TheseresultsdemonstratedthatthequalityandpurityofRNA obtainedbythemethodofSTE couldmeetthedemandsofmolecularbioloyg experiment． Keywords：Pleurotusfe