不同浓度地塞米松体外对人成骨细胞和破骨细胞分化的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(7)：1393—1397 · l393 · [文章编号] 1000—4718(2011)07—1393—05 不同浓度地塞米松体外对 人成骨细胞和破骨细胞分化的影响 许多荣 ， 许辉茹 ， 王荷花 ， 李 娟 ， 昊洪福 ， 邓宇斌 (中山大学 附属第一医院血液科，中山医学院病理生理学教研室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：探讨地塞米松(DEX)体外对人成骨细胞(OBs)和破骨细胞 (OCs)分化的影响。方法：以 DEX为主要成分的诱导剂体外刺激正常人骨髓间充质干细胞 (MSCs)，茜素红染色及碱性磷酸酶 (ALP)定量法检 测 OBs间钙结节形成及OBs中ALP水平；改变DEX浓度后 ，再检测ALP水平以及用Westernblotting检测 OBs中 磷酸化 GSK一3B蛋白的表达；外源性核因子 KB受体活化因子配基 (RANKL)刺激人骨髓单个核细胞(BMMs)14d 后，用抗酒石酸酸性磷酸酶染色鉴定OCs形成情况、Westernblotting检测BMMs中RANKL下游的信号途径；不同浓 度 DEX刺激 MSCs7d后 ，用 ELISA和Westernblotting检测培养液 中可溶性 RANKL(sRANKL)水平及 MSCs中 RANKL蛋白表达。结果：含0．1I~mol／LDEX的诱导剂刺激MSCs后可有钙结节形成，在DEX0．001—0．1ixmoL／L 浓度范围内，OBs中ALP水平逐渐增高、磷酸化 GSK一3B蛋白表达逐渐增强，当DEX浓度进一步增加后(0．1—10 ~mol／L)，ALP水平和磷酸化GSK一3B蛋白表达反而下降；外源性 RANKL可以诱导BMMs分化为OCs，且BMMs 中磷酸化 IKBot、SPAK／JNK、p38MAPK、p44／42MAPK表达增强；在0．001—10ixmol／L浓度范围内，DEX刺激 MSCs 后，培养液中 sRANKL水平和MSCs中RANKL蛋白表达逐渐增高，且 sRANKL水平和DEX浓度呈正相关 (r= 0．821，P0．05)。结论 ：在低浓度 (0．001—0．1vmol／L)范围内，DEX既促进OBs分化，又可促进OCs分化。在高 浓度 (0．1—10~mol／L)范围内，仍能促进OCs分化 ，但失去了其对OBs的分化作用。 [关键词] 地塞米松；成骨细胞；破骨细胞 [中图分类号] R336 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．07．026 Effectofdexamethasoneondifierentiationofhumanosteoblastandosteo- clastin vitro XUDuo—rong，XUHui—ru ，WANGHe—hua ，LIJuan ，WUHong—fu ，DENGYu — bin (DepartmentofHematology，TheFirstAffiliatedHospital,2DepartmentofPathophysiology，ZhongshanSchoolofMedicine， SunYat—senUnivemity，Guangzhou510080，China．E—mail：xudr@hotmail．corn) A『BSTRACT] AIM ：Toinvestigatetheeffectofdexamethasone(DEX)ondifferentiationofhumanosteoblasts (0Bs)andosteoclasts(OCs)ivitro．METHODS：Thenormalhumanbonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs) werestimulatedwiththeinducermainlycontainingflEXinvitro．Alizarinredstainingandalkalinephosphatase(A )kit wereusedtoi