广西散发性结直肠癌缺失基因突变及杂合性缺失的研究.pdfVIP

· 2l62 · 广东医学 2011年8月 第 32卷第 16期 GuangdongMedicalJournal Aug 2011，Vo1．32，No．16 广西散发性结直肠癌缺失基因突变及杂合性 缺失的研究珠 龙陈艳 ，徐艳松 ，李卫 ，高枫 ，唐卫 中 广西医科大学第一附属医院 结直肠肛门外科，儿科 (南宁530021) 摘【要】 目的 通过分析DCC基因突变和杂合性缺失，初步探讨DCC基因在广西散发性结直肠癌发生发展 7 中的作用和意义。方法 用单链构象多态性和DNA测序方法分析73例散发性结直肠癌患者癌组织及其正常黏 膜组织DCC基因第4、28、29号外显子点突变。用MspI酶酶切及琼脂糖凝胶电泳分析 MpI酶切位点的杂合性 缺失(LOH)。结果 DCC基因第4外显子201密码子 (CG)突变66例 ，发生率为90．4％。第4内含子第8碱基 l例AC多态性改变，发 生率为 1．4％。第28及 29号外显子未见异常。MspI—L0H7例，LOH率为 29．2％。 1 2 结论 201密码子 (CG)为正常的多态现象，与结直肠癌的发生发展无关，不能作为结直肠癌的生物指标。内含 子NT_010966：g．1459443AC为偶见的多态性改变。而MspI位点LOH可能与晚期结直肠癌有关。 【关键词】 DCC基因；单链构象多态性；DNA测序；突变；杂合性缺失 结直肠癌是最常见 的消化道肿瘤之～，2008年美 13例，左半结肠癌 22例 ，直肠癌38例；管状腺癌 58 国约有 15万例新发病例，而同年估计将有49960例患 例，乳头状腺癌5例，黏液腺癌及低分化腺癌 10例；黏 者死于结直肠癌 ，其发病率和病死率分别居所有癌症 膜下及浅肌层2例，浅肌层 以下至浆膜层以上 19例 ， 的第 4位和第 2位…。而抑癌基因的异常在结直肠癌 全层及全层以下 52例；有淋 巴结转移 34例 ，无淋 巴结 的发生、发展过程 中起重要作用，结直肠癌缺失基因 转移39例 ；DukeS分期A期 l4例，B期22例，C期22 (deletedincoloreetalcarcinoma，DCC)是 目前发现最大 例，D期 l5例。所有患者在术前均未做过放疗及化 的抑癌基因之一。本研究通过分析 DCC基因突变和 疗。取肿瘤和距离肿瘤边缘 10cln以上眼观正常的结 杂合性缺失(LOH)来初步探讨 DCC基因在广西散发 直肠黏膜组织各约2g，试剂盒提取DNA。 性结直肠癌发生发展中的作用和意义。 1．2 PCR扩增 50 LPCR反应体系含 1×Buffer(含 1 资料与方法 MgC12)，200~mol／LdNTPS，0．2~zmol／L各引物，4ng／ 2 L模板 DNA，TaqDNA聚合酶 0．5 L，灭菌用水补足 3 1．1 一般资料 取广西医科大学第一附属医院结直 至50 L。循环条件为 ：94℃ 预变性 3min后，于94℃ 肠肛门外科 1997年8月至 1999年9月及2009年8月 变性30S，56～60~C退火45S(扩增 目的片段和引物序 手术切除的部分结直肠癌标本共 73例。所有结直肠 列等见表 1)，72℃延伸45S，共30个循环，最后于72℃ 癌标本均经本院病理科病理检查确认。其 中，男 47 例 ，女26例；年龄l8～83岁，中位年龄58岁；右半结肠癌