mRNA差异显示技术、PCR技术及其在动物营养研究中的运用.pdfVIP

维普资讯 科Sc技ie视，e野andTechnologyOutl。。k 18 棚科广萄2005 9期 mRNA差异显示技 、PCR技 及其在动物营荠研究巾晌运用 李 宏 周庆安 刘文刚 李 琳 摘 要 ：21世纪将是生命科学的世纪。当前，世界各 同马上就可以通过图谱知道 ，并据此分离到该基 国都将分子生物学视为本国科技发展的重点。分子生物学 因。该技术的主要流程是将细胞的mRNA提取出 技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基 来，用反转录酶将 mRNA转变为cDNA，后经多次 础提供 厂强有 力的实验工具。笔者 旨在对 mRNA差异显 PCR随机扩增以达到可检测水平 ．再通过在测序 示技术 、PCR技术两种最常用的分子生物学技 术手段 的 凝胶上电泳条带 比较 ．筛选 不同表达的基因． 原理 、特点及其在动物营养研究巾的应用作一综述。 并 回收这些 DNA片段 ．经扩增后作为探针在 关键词 ：mRNA；PCR：动物营养 cDNA或基因组 DNA库中扫描找到相关基因。 1．2特点 现代生物技术是从微观的细胞水平、分子水 简单易行 ，MRNA差异显示技术所依靠的 平乃至原子水平(纳米生物学)对生命奥秘进行研 PCR和DNA测序凝胶 电泳技术均已成熟 ：灵敏 究的先进手段。随着动物营养学研究的不断深 度高 ．mRNA差异显示技术 只需提取 20p~g的 入，运用现代生物技术手段揭示营养物质在动物 mRNA；重复性好 ；多能性 ，一次试验可比较多个 机体内作用的分子机制，已经成为现代动物营养 不同的种类和组别 ．且可以进行细胞问的双向 学发展的趋势之一。 (表达或高或低)比较 ；快速。 1．3 应 用 1mRNA差异显示技术 1．1 原理 1．3．1快速发现营养物质相关新基因 mRNA差异显示技术的特点之一就是猎取 高等生物细胞 内约含有 10万个不同的基 新基因。利用传统方法发现一种营养相关蛋白质 因，而对于每一个特定的细胞仅表达其中的 1／6 (或基冈)，往往要经过几年或数十年的艰辛研究。 左右 ，产生约 15000种 mRNA。mRNA差异显示 如硒蛋白质P，该蛋白质从发P~(1972)、纯化(1987) 技术的基本原理就是合成两组引物 ，通过随机组 ． 到克隆(1991)花费了近 20年的时间。而 mRNA差 合，使每个细胞中表达的 15000种 mRNA均有 异显示技术发现一种新基因(或蛋 白质)所用 的 扩增机会 原则上该方法可以检测到细胞中约