HPLC色谱分析中常见问题与解决方法.pdfVIP

HPLC色谱分析中常见问题 与解决方法 姚彤炜 主讲 色谱柱失效症状  色谱柱压增高  峰变宽，拖尾，裂峰  塔板数下降，选择性下 降，分离度降低 色谱柱失效的原因  保留值减小或增大 进口滤片堵塞 吸附了样品杂质 柱填充不良，使用久， 机械及热冲击造成空洞 固定相遭化学侵蚀 柱凹陷—— 出现裂峰现象，填料与色谱柱顶 端不齐平，可用相同填料填平凹陷处。 压力影响——应避免突然的压力波动与任何 的机械与热力冲击，如： 色谱柱掉在实验台上 骤然改变柱温 进样过程中转动进样阀太慢引起压力波动， 使色谱峰产生裂隙  柱压升高原因  强保留样品组分——强吸附组分易聚集在柱进口 填料上，严重缩短色谱柱寿命。尤其是生物样品 提取物、含油成分、缓控释制剂中的高分子辅料 等。当严重拖尾峰出现时往往是强保留污染物在 柱口处聚集的信号。  解决办法  使用保护柱可延长分析柱寿命  每天实验后应用强溶剂（例甲醇-水等，至少20- 30倍柱体积的量）冲洗色谱柱  并定期进行保养，以低流速的强溶剂较长时间冲 洗色谱柱  样品纯度差——有微小的颗粒堵塞管路。  可用滤膜过滤样品后再进样。  样品浓度高——连续进样，造成过载。  如果样品吸收度不是太低，使样品浓度在 0.5mg/ml以下较适宜。  流动相中缓冲液浓度过高，有机相比例大— —在色谱过程中堵塞管路，析出的盐结晶还 磨损泵、进样阀密封圈造成漏液。  缓冲液浓度一般控制在20mmol以下较适宜， 测定完毕后必须及时冲洗。 注意！ 一旦柱压升高，应停止测定，用水 冲洗数小时或更长时间，待压力下降后 再测定，如果不清楚堵在哪一段，则应 逐级检查，换泵头上滤芯，保护柱等。 67 进样阀 流路检查顺序 泵 预 柱 分 析 柱 检测器  柱效低的原因  频繁更换流动相组成——加速柱效降低。  最好一根色谱柱使用的流动相成分和pH值 相近，如始终在酸性条件下或碱性条件下 工作。  色谱柱的选择不合适或使用时间久  更换色谱柱（厂家，型号）  进样操作不当  转动进样阀时应一次转到位，不能过慢或 停顿，否则易造成裂峰。  样品溶剂与流动相成分不匹配  样品溶剂与流动相成分不匹配，造成前沿 峰，倒峰或裂峰。如样品用纯甲醇作溶剂， 而流动相中甲醇比例很低，这样易出现前 沿峰，改变样品溶剂成分或比例，使醇-水 比例接近于流动相。 裂峰 柱凹 陷？