“三阶段法”分离培养与鉴定人脐血间充质干细胞.pdfVIP

1188 新疆医科大学学报 JOURNAIOFXINJIANGMEDICALUNIVERSITY 2010Oct．，33(10) “三阶段法分离培养与鉴定人脐血间充质干细胞 张东辉 ，许永华 ，许 琴 ，李建瑛 ，是文辉 ，李佳佳 ，卢开伯 ， 邢彦超 ，于 良宽。，龙志新 (兰州军区乌鲁木齐总医院实验动物科 ，。输血科 ，。妇产科 ；新疆 出入境检验检疫局 ，新疆 乌鲁木齐 830000) 摘要 ：目的 探讨运用 “三阶段法”分离培养与鉴定人脐血问充质干细胞 的效果。方法 取人脐带血 4份 ，经 过 3个阶段 (去除红细胞阶段、短暂培养阶段、持续培养阶段)，以完全低糖 DMEM(含 2O 胎牛血清)为培养基 ，纯 化分离人脐血 问充质干细胞 。传代至第 3代通过流式细胞仪和间充质干细胞诱导分化为成骨细胞进行鉴定。结 果 4份人脐血 中3份分离出间充质干细胞 。分离 培养 的细胞经流式 细胞仪检测不表达造血细胞 的抗原 (CD34 )，表达间充质干细胞 的抗原 (CD29 、CD44 、CD105 )，并能向成骨细胞方 向分化 。结抡 “三阶段法” 能够简便、有效地从人脐血 中分离出间充质干细胞 。 关键词 ：人脐静脉血 ；间充质干细胞 ；体外培养 中图分类号 ：R446；R34 文献标识码 ：A 文章编号 ：1009—555l(2010)10—1188—03 Cultureandidentifyhumna mu bilicalcordbloodMSCsusingthreephaseapproach ZHANGDon-ghui，XUYong-hua，XUQing，etal (DepartmantofAnimalExperiment，UrumqiGeneralHospitalofLanzhouCommand， _PLA，Urumqi830000，China) Abstract：Obiective Tocultureandidentifyhumanumbilica1cordbloodM SCs(mesenchymalstem cells) usingthreephaseapproach．Methods Throughthreephases (removalofredblood cell，brieflyculturing andphaseoflastingculturing)toseparateM SCsfrom 4humanumbilicalcordbloodsamples．Cultureme— dium withlow glucoseDMEM wassupplementedwith20 fetalcalfserum．IsolatedM SCswerepassaged tothethirdgeneration foridentifying．Results ThreegroupsofMSCswereseparated from 4groupsof samples．By flow cytometry analysising ，cellsexpressed MSCs surfacemarkersofCD29，CD44 and CD105positivelyandCD34negatively．Theresultofthedifferentiationofosteoblast—likecellsderivedfrom human umbilicalcordbloodwaspositivealso．Conclusion W ecan easilyand effectively separateMSCs from humanumbilicalCordBloodbythreephasesapproach． Keywords：human umbilicalcordblood；mesenchymalstem cells；invitroculture 人脐 血 间充 质 干 细胞 (umbilicalcordblood 免疫磁珠法分离人脐血间充质干细胞 ，不但成本高 ， mesenchymalstem cells，UC MSCs)具有 良好 的 而且难 以培养成活；利用密度梯度离心法分离培养 多向分化潜能，在适 当的诱