文昌鱼卵黄蛋白原纯化、鉴定、免疫定位及功能.pdfVIP

中文摘要 今。黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是卵生动物卵黄蛋白 的前体。文昌鱼 Vg的纯化、特性和产生部位至今未见 报道)0沐文以文昌鱼卵巢卵为实验材料，用Sephadex G-200凝胶过滤柱和 DEAE-23离子交换柱首次从文昌 鱼卵巢卵中纯化 了卵母细胞卵黄蛋 白并进行了特性研 究;纯化的卵母细胞卵黄蛋 白原通常以同源二聚体形式 存在，天然电泳时分子量大约为320kDa,SDS电泳时分 子量大约为 160kDa。天然 电泳后的凝胶分别用 甲基绿进 行磷蛋 白特异性染色、油红 。和苏丹黑进行脂蛋 白特异 性染色、高碘酸一希夫试剂进行糖蛋白特异性染色，结果 证明文 昌鱼卵母细胞卵黄蛋 白是一含糖、含磷、含脂 的 蛋白。妙外，卵母细胞Vg的氨基酸组成分析表明它的 氨基酸组成与从不同的脊椎动物或无脊椎动物中分离的 Vg的氨基酸组成非常相似，因此这幼纯化的卵母细胞卵 黄蛋白是文昌鱼的Vg.户纯化的文昌鱼Vg免疫小白鼠 制备抗血清，免疫双扩散法测得抗血清效价为 1:32, 免疫斑点法测得抗血清效价约为 1:2000.Westernblot 检测发现不仅雌性文昌鱼全年都有 Vg的合成，而且雄 性文昌鱼体内也有可检出量的 Vg的合成。组化实验证 明雌性文昌鱼 Vg主要分布在卵巢内，肠上也有少量的 分布;性腺发育初期雄性文昌