我国养殖大菱鲆病毒性红体病的研究.pdf

我国养殖大菱虾病毒性红体病的研究 摘 要 大菱坪(Scophfhalmusmaximus)属名贵海水经济鱼类，原产于欧洲沿 海。自1992年引入我国并于，998年开展大规模养殖以来，大菱奸己成为我 国北方沿海地区最重要的工厂化海水养殖鱼类之一，年产值达，5亿元以上。 但近年来我国养殖大菱鲜疾病流行日益严重，己严重威胁着该养殖产业的健 康发展。由于大菱醉是从国外新引进的养殖品种，我国在其疾病研究方面基 木上还是空白。 通过大量的疾病调查，本研究发现了一种可导致我国养殖大菱虾大量死 亡的流行性疾病。依照病鱼的外观症状，将该病暂称之为大菱鲜 “红体病” (reddishbodysyndrome,RBS)。通过对RBS的流行病学、组织和细胞病理 学、病原人工感染和细胞接种实验、病毒的纯化和分子生物学分类鉴定等研 究，本论文在国内外首次证实大菱鲜红体病是由一种新的鱼类虹彩病毒— “大菱虾红体病虹彩病毒”(turbotreddishbodyiridovirus,TRBI功— 引起 的病毒性疾病，应称之为 “大菱坪病毒性红体病”(viralreddishbody syndromeofturbot). 大菱娜病毒性红体病的流行病学调查显示:苗期、养成期、亲鱼期的大 菱鲜均可感染此病，但以养成期最为常见;发病鱼全长一般在 10厘米到20 厘米，体重介于100克至400克之间。病鱼摄食量低或不摄食、活力弱、呼 吸缓慢、散群，分散伏于养殖池四周或在水面附近缓慢游动。病鱼在出现以 上症状后很快死亡，属急性死亡，一个月内的累积死亡率达20%以上。该病 在养殖期的各个月份均可以发生，高发季节为每年的8月至12月，在5月至 7月则相对较少。至2003年，该病的流行范围己遍布整个山东半岛沿海地区， 涵盖了我国大菱坪的主产区。 病毒性红体病大菱鲜的解剖学特征主要有:(1)病鱼体表无明显损伤， 但腹面沿脊椎骨附近皮下淤血、发红，侧鳍、尾鳍、胸鳍及鳍基部充血、发 红:(2)病鱼贫血，鳃外观呈暗灰色;(3)病鱼血液稀薄、色淡，凝固性差: (4)病鱼胃肠壁呈点状出血;(5)病鱼肾脏失血发暗，Q灰白色。 大菱-1病毒性红体病的组织病理学研究发现，病鱼的脾脏、’肾脏存在有 大量的肥大细胞，病鱼鳃丝、脾脏、肠、}R脏和肝脏组织均存在不同程度的 坏死。通过透射电子显微镜观察，在病鱼的多种组织包括鳃、脾脏、肠、肾 脏中可以观察到一种大小相同、形态相似的球状病毒粒子，即丁RBIV。这是 感染我国养殖大菱鲜的TRBIV首次被发现。该病毒的特征包括:(1)成熟病 毒粒子具二十面体状的蛋白衣壳(其横切面为六边形或五边形)和球状的病 毒核心，病毒含有典型的内脂质膜样(internallipidmembrane-like)结构; (2)成熟病毒粒子的二十面体状衣壳和球状核心的大小分别为 125nm和 67nm左右;(3)病毒在宿主细胞质中装配并以出芽的方式释放;(4)病毒 靶组织为鱼体的脾、’肾、鳃、肠中的上皮和结缔组织，被病毒感染的细胞 多表现为细胞肿大，细胞质匀质化。这些研究明确了大菱鲜病毒性红体病的 病理学特征，为该病的病理学诊断提供了依据。 为了证实丁RBIV是大菱娜病毒性红体病的病原，本研究进行了大菱虾病 毒性红体病的人工感染试验。将过滤除菌的含大量下RBIV的病鱼脾组织匀浆 液，通过腹腔注射的方式对健康大菱鲜进行人工感染，结果感染鱼在3周内 的累积死亡率达85.7%，死亡大菱鲜表现出腹面和鳍边发红等外观症状。由 此证明TRBIV具有较强的致病力。为了进一步验证下RBIV的致病性和病原 性，本研究还开展T牙鲜胚胎细胞系(flounderembryoniccellline,FEC)培养 细胞接种丁RBIV的试验。结果表明，过滤除菌的含大量TRBIV的病鱼脾组 织匀浆液可以使FEC单层培养细胞产生明显的细胞病变(cytopathiceffects, CP日，在病变 E「C培养细胞的细胞质中可以观察到大量的丁RBIV。以上实 验结果证实丁RBIV具有较强的致病性和病原性。通过差速和超速离心，从病 毒性红体病大菱虾脾、肾组织内纯化出一种直径约为115一125nm的球状病 毒。该病毒在形态和大小方面都与在病鱼组织超薄切片中发现的下RBIV相似， 也与接种丁RBIV的 E「C培养细胞中观察到的病毒相似。以上这些研究结果 证明，TRBIV是我国养殖大菱鲜病毒性红体病的病原。