碱性艳蓝BO对凝胶上的DNA的检测及相关检测机制的研究.pdfVIP

论文题EI： 越：眭抱堇量Q过趟膣土坠丛△检测 丞担差捡测扭剑数班究 论文评阅人： 答辩委员会主席： 答辩委员会成员： 论文答辩日期：沪／，3。j、．哆／， 目 录 摘要…………………………………………………”1 Abstract·····…··…··…·…·····……··…···…·…·…-·…·……·…·-·-·-3 前雷…………………………………………………”5 第一部分VPBBO染料在琼脂糖凝胶上对DNA检测的应用研究 材料与方法……………………………………………．．9 结果与讨论……………………………………………．14 小结……………………………………………………………………23 第二部分VPBBO染料在聚丙烯酰胺凝胶上对DNA检测的应用研究 材料与方法……………………………………………24 结果与讨论……………………………………………27 小结…………………………………………………．32 第三部分VPBBO在DNA检测中的检测机理研究 材料与方法……………………………………………33 结果与讨论……………………………………………36 小结…………………………………………………43 参考文献……………………………………………．．43 附录…………………………………………………49 致谢…………………………………………………53 综述…………………………………………………54 碱性艳蓝BO对凝胶上DNA的检测及相关检测机制的研究 摘要 目的： 1．研究开发快速、灵敏、亲环境的DNA检测方法，为聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖 凝胶上DNA的检测提供合适的方法； 2．探究凝胶上DNA的检测机理，阐明VPBBO染料与核酸的相互作用，探讨了 其作用方式和作用机理，将有助于人们从分子水平上了解检测机制。 方法： 的各个因素，如染色液的浓度及组成、染色时间、脱色时问及各种盐离子对 检测结果的影响等，建立DNA染料检测操作步骤； 2。为了能更深入的研究染料检测的机理，通过采用光谱法、粘度法、分子对接 模拟、质谱法等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的相互作用。 结果： 1．分别在琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶上建立了DNA染料检测方法，灵敏度分 别为0．4-0．8 ng／band和O．8-1．6ng／band，其操作步骤分别如下： (1)琼脂糖凝胶 a、染色：在25 液中染色10min； min。 b、脱色：在25ml组成为40％乙醇／1％乙酸脱色液中脱色3—5 (2)聚丙烯酰胺凝胶 a、染色：在50ml组成为0．001％VPBBO染色液中染色10rain； ml rain。 b、水洗：在50DW中水洗1 2．通过采用光谱法、粘度法、分子对接模拟法、质谱法等多种研究手段来共同 探究染料与DNA的结合机制，VPBBO染料和DNA以沟槽形式相结合。 结论： 1．新建立的DNA染料检测方法在琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶上的灵敏度分 别为0．8—1．6 ng／band和0．4—0．8ng／band，与EB荧光染色法相似； 2．通过采用光谱法、粘度法、分子对接模拟法、质谱法等多种研究手段来共同 研探究染料与DNA的结合的机制，VPBBO染料和DNA以沟槽形式相结合。 通过阐明VPBBO染料与核酸的相互作用，探讨了其作用方式和作用机理， 将有助于人们从分子水平上了解检测机制。 关键词：凝胶电泳；染料染色；DNA；结合模式；沟槽结合 DetectioninGelVictoriablue TheResearchofDNA by pure anditsrelatedMechanism BO