实验十一人类X染色质的观察.pptVIP

实验十一 人类X染色质的观察 一、实验目的 初步掌握观察与鉴别X染色质的简易方法 识别其形态特征及所在部位。 二、实验原理 剂量补偿效应 人类正常男性体细胞中只有1条X染色体，不失活，故见不到X染色质； 女性的2条X染色体中，在间期时有一条不表现活性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以显示，成为便于观察的性染色质体(或称X-小体、Barr小体)。 三、实验材料 1、材料 正常女性口腔颊部黏膜、毛发根部细胞 2、实验器具 显微镜、洁净的载玻片和盖玻片、刮片、吸水纸 3、实验药品和试剂 95％酒精、50％醋酸、2％乳酸醋酸地衣红 四、实验步骤 1、口腔颊部黏膜细胞的观察 （1）用清洁灭菌的刮片，从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞，在原位刮取2～3次 （2）分别涂抹在干净载玻片上，每次可涂1～3片，涂抹范围为1～2张盖玻片大小。 （3）待稍干后，滴加1～2滴2％乳酸醋酸地衣红，在室温下染色20～30 min，勿使干燥， （4）加盖玻片，并覆以吸水纸，用手指轻度加压后进行镜检。 涂片后如不即检查，应在稍干时立即放入95％酒精中固定30 min以上(也可固定l～2 d)，取出，晾干后号，放置冰箱内保存。 2、毛发根部细胞的观察 （1）拔取一根带有毛根的头发，自基部截取2 cm左右置载玻片上， （2）在毛根部加1滴2％乳酸醋酸地衣红染液，片刻后再加1滴50％醋酸(或只加50％醋酸)，低倍镜下观察。 （3）待毛根鞘软化后拨去毛干，重新加1滴染液，覆以盖玻片， （4）在酒精灯上轻微加热后静置5 min，隔一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。 3、X-染色质的辨认 （1）低倍镜下： 检出典型的可数细胞，其标准为： ①核质呈网状或细颗状分布； ②核膜清晰，核无缺损； ③染色适度； ④周围无杂质。 （2）高倍镜或油镜下观察 选定细胞后， 在高倍镜或油镜进一步观察。 X-染色质的形态表现为一结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大小约1μm，常附着于核膜缘或靠近内侧，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形及双球形等。 正常女性口腔黏膜细中30％～50％有1个Barr小体，在不同实验室中计数的差别较大，在男性中偶尔可见不典型者。 五、作业 (1)观察50个女性可数细胞，同时观察50个男性可数细胞为对照，分别计算显示X-染色质细胞所占的百分比。 (2)观察中选绘4～5个典型细胞，示明X-染色质的形态部位。 * * *