B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基因反式激活能力的比较.DOCVIP

临床医学论文-B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白对MDR1基因反式激活能力的比较 【摘要】? 目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对多药耐药基因1(MDR1)反式激活能力的差别。方法PCR扩增B、C基因型HBV X基因并克隆于pcDNA3.1/HisC载体(重组载体分别为pcDNA3.1/HisCXB及pcDNA3.1/HisCXC)。以FuGENE6将重组表达载体转染HepG2细胞,采用融合表达的Xpress多肽表位抗体,通过Western blot检测目的蛋白在不同时间段的表达。PCR扩增MDR1基因启动子并克隆于萤火虫荧光素酶报告载体pGL3Basic(重组载体为pGLMDR)。pGLMDR分别与pcDNA3.1/HisCXB或pcDNA3.1/HisCXC共转染HepG2细胞,转染后48 h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性。实验数据以SPSS 11.5软件分析。结果成功克隆X蛋白表达载体及MDR1报告载体。Western blot显示pcDNA3.1/HisCXB或pcDNA3.1/HisCXC在HepG2细胞中均能表达HBV X蛋白,以转染后48 h为最高。当pGLMDR报告质粒与X基因重组载体或空载体质量比在1∶2~1∶4范围内,萤火虫荧光素酶在各转染细胞内的活性依次为pcDNA3.1/HisCXB+pGLMDR组pcDNA3.1/