党参成分对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用研究.pdfVIP

中文摘要 中 文 摘 要 研究背景、目的 现代实验研究表明，党参对缺血缺氧时细胞能量代谢有明显的改善作用。 可明显提高机体整体的抗缺氧能力，对缺血后自由基的损伤有抑制作用，并有 代初设计并应用于学习记忆脑机制研究的。学习记忆是脑的高级神经生理活 动。学习是指接受外界环境信息而影响自身行为的过程，记忆则是指获得的信 息或经验在脑内储存、加工和提取的过程。学习记忆既是认知活动中的重要方 面。也是智力结构中的重要要素，是脑的高级神经功能活动。近年来，Morris 水迷宫已成为检测实验动物学习记忆水平的重要工具。党参作为补气扶正药的 代表药，用于治疗中风病时的治疗学目的不仅局限在救命、挽救脑组织，很重 要的一个方面是挽救、恢复脑高级神经功能。自由基是指电子轨道上有不配对 电子的原子、分子，许多实验证明，自由基具有很高的化学活性，可快速攻击 其他化合物的分子并产生更多的自由基，自由基破坏膜结构中蛋白成分、引起 膜脂质过氧化，导致膜损伤、线粒体功能障碍、溶酶体破裂、细胞溶解和组织 水肿等一系列损害作用，称之为自由基连锁反应。在正常状态下，机体自由基 的产生和清除间存在着动态的平衡，产生的自由基可被超氧化物歧化酶 (Superoxide Peroxidase， 伤对缺血组织产生保护作用，但在脑组织党参提取物(党参总皂苷和党参皂菅 LRT一1)是否可通过上述机制发挥脑缺血保护作用，目前尚无相关报道。针对 中医药治疗中风病急性期广泛使用的祛邪治则，本实验在孙塑伦教授提出的中 风病急性期“扶正护脑”治则指导下，在明确党参的脑缺血保护作用基础之上， 采用双侧颈总动脉阻断合并硝普钠降压法复制大鼠缺血性脑损伤模型，尾静脉 察三者对脑缺血再灌注大鼠模型的学习记忆能力的改善作用，并迸一步研究党 参成分对脑缺血保护作用是否与抗自由基损伤有关。为中风病急性期“扶正护 脑”治则和中药党参及其成分用于中风病急性期i描床治疗提供实验依据。 实验内容及方法 实验一党参成分对脑缺血再灌注模型大鼠学习记忆行为的影响 造模前一天预防性给予尾静脉注射相应药物，采用反复夹闭双侧颈总动脉合并 硝普钠降压法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型。造模5d后，用染发剂将其头 s水迷宫 颈部的背侧面染黑，按照造模顺序依次把大鼠放入撤去平台的Morri s水迷宫试验，五天的 水池中，每只大鼠预游泳3min。第六天开始正式Morri 定向航行试验后再进行空间探索实验，记录其逃避潜伏期、120s内穿过平台所 在位置的次数以及在120s内搜索平台的路线图。空间探索实验结束后当天用 党参成分对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究 4％的多聚甲醛PBS溶液灌杀取脑，采用胍染色光镜观察病理形态学改变。 实验二党参成分对大鼠脑缺血再灌注损伤SOD和MDA改变的影响 造模前一天预防性给予尾静脉注射相应药物，采用反复夹闭双侧颈总动脉合并 硝普钠降压法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型。造模开始前以及造模后24h、 48h后分别注射药物1次，共4次。造模后48h低温快速取脑，于冰水中用玻 15min取出上清液，-20℃保存待测。采用双缩脲法测定脑组织匀浆蛋白含量； 采用黄嘌呤氧化酶法测定脑组织匀浆SOD活性；采用硫代巴比妥酸法测定脑组 织匀浆MDA含量。以上各步骤均按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测 试说明书操作，并按其提供的计算公式计算出所测脑组织SOD活性和MDA含量。 结果 1 Morris水迷宫的定向航行实验中，与模型组比较血栓通注射液组和党参皂苷 3±3．04)中效果均不显著 党参总皂苷在定向航行和空间探索实验(5．1 (PO．05)。 50 ±0．6957)的影响不显著(PO．05)。 3光镜观察H．E染色结果显示脑缺血再灌注模型大鼠海马CAl区神经细胞脱 失，碎裂、核固缩、溶解，仅残存极少量的正常神经元，同时存在染色质浓缩、