阿斯匹林抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖及其机制研究.pdf

中文摘要 阿斯匹林对卵巢癌细胞株SK_0v一3增殖的 抑制及其机制的研究 摘 要 目的：卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之 一，严重危害着女性的生命健康。尽管卵巢癌细胞减灭术的 水平不断提高，新的化学治疗药物也不断开发利用，由于缺 乏特异性症状和有效的早期诊断方法，多数患者一经发现， 己处于晚期。晚期卵巢癌的药物及手术治疗效果差，使得卵 巢癌5年存活率一直徘徊在25％．30％。为此，有必要寻找有 效的卵巢癌防治措施。 anti．inflammatorydrug，NSAID)，其药理作用为抑制环氧化 实验研究证实，阿斯匹林及其他非甾体类消炎药具有降低肿 瘤发病率的作用；肿瘤组织中COXs过度表达，PGE2产生过 多，可刺激肿瘤细胞的增殖及机体的肿瘤免疫机能降低。许 多研究也证实了阿司匹林具有抗结肠癌、胃癌、食管癌、肺 癌的作用。有关阿司匹林抗卵巢癌的研究很少，目前国内本 方面的研究尚属空白。本研究以人卵巢癌细胞株SK-OV．3 为研究对象，探讨阿司匹林对卵巢癌细胞株SK．OV．3细胞增 殖、诱导其凋亡的情况，观察凋亡细胞形态学变化，检测 bcl一2、bax基因的表达变化，进一步探讨阿司匹林诱导 SK．OV．3细胞凋亡的机制。 中文摘要 方法：体外培养人卵巢癌细胞株SK-OV-3，以相同浓度 种植于96孔板细胞培养中，在含10％胎牛血清的RPMI．1640 培养基中，置37。C、C02含量5％、湿度99％的孵育箱孵育 24小时后，更换含0、0．5、l、2、5、10mmol／L浓度的阿司 匹林，分别再孵育24、48、72、96小时后取出，用MTT还 原法检测细胞增殖情况：用1、5、10mmol／L浓度的阿司匹 林与SK-OV-3细胞孵育48小时，然后用流式细胞术(flow cytometry。FCM)检测细胞凋亡情况和细胞周期的影响：用 同样浓度的阿司匹林与SK-OV-3细胞孵育72小时，用 Giemsa染色后在光学显微镜下观察凋亡细胞形态学的变化； PCR，RT-PCR) 用反转录聚合酶链反应(reverse-transcription 的方法，检测用药前后凋亡相关基因bcl．2和bax的表达。 所有数据均用均数(i±s)表示，用SPSS统计分析软件进行统 计学分析，各组均数的比较行单因素方差分析(ANO、，A)， 用最小显著差法(1east difference，LSD)作两两比 significant 较，p0．05为有显著性。 结果：1阿斯匹林对卵巢癌细胞株增殖的抑制作用：与 对照组比较，阿司匹林作用SK—OV-3细胞24、48、72、96 小时后，对SK．OV-3细胞的生长有明显的抑制作用，并存在 着浓度和时间的依赖性。0．5、I、2、5、10mmol／L阿司匹 林作用SK．OV-3细胞72小时细胞的生存率分别为95．60± ±2．22％，随着浓度提高，卵巢癌细胞的生存率出现明显的 降低趋势(Po．001)，说明阿斯匹林对SK-OV-3细胞的增殖 的抑制有明显的量校关系。终浓度为5mmol／L的阿斯匹林作 用细胞24、48、72、96小时，细胞生存率分别为92．19±5．88％、 中文摘要 间的推移阿斯匹林对SK．OV-3细胞增殖的抑制明显的增加 (P0．001)，具有明显的时效关系。2流式细胞仪检测结果： 对照组和1、5、10mmol／L浓度的阿斯匹林作用SK．OV-3细 胞48小时，流式细胞仪检测结果显示，SK-OV-3细胞凋亡 ±0．44％。实验组与对照组的凋亡百分比比较，实验组 SK-OV-3细胞的凋亡率明显增高(po．001)。且随着浓度增加， 细胞凋亡的百分比随之增加，各剂量的阿司匹林作用卵巢癌 SK．OV-3细胞48小时，在DNA直方图上G。期峰前呈现明 显的细胞凋亡峰即亚G，期峰，说明阿斯匹林可诱导卵巢癌 SK．OV-3细胞的凋亡。3流式细胞仪检测细胞周期的变化： 对照组SK．OV-3细胞的Go／Gl期和G2／IV[期细胞数分别为 小时后SK-OV-3细胞的Go／Gl期和G2／M期的细胞数分别为 斯匹林作用48小时后，细胞周期发生明显改变，即随着阿斯 匹林浓度的增加，Go