鸭源H3N8亚型流感病毒基因特征及其致病性研究.pdf

2澎 ··京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛”论文集 鸭源H3N8亚型流感病毒的基因特征及其致病性研究 蒲娟 樊玉磊 王哲 刘金华 (中国农业大学动物医学院 北京 100193) 摘要：H3亚型禽流感病毒在家鸭中广泛存在，具有重要的公共卫生学意义。2004—2005年，对 北京市活禽市场进行流感流行病学监测中，从健康家鸭的泄殖腔拭子中分离到6株耶鹏亚型流感 病毒。全基因组测序和进化分析表明，6株分离株的尸．B2和PA基因与H5N1亚型禽流感病毒同源性 很高。鸡的感染实验说明，分离株能够感染鸡，在与大肠杆菌协同作用下能够引起鸡的发病和死亡； 鼠的致病性实验说明，能够从攻毒组的鼠肺中分离到病毒，并且能够导致小鼠发病和死亡；没有从同 居组鼠中分离到病毒，但可见该组小鼠的体重减轻和肺部的病理变化。不同分离株对鸡和小鼠的致 列存在，3个位点的差异，主要存在于朋2和NSl基因。我们的研究结果显示，邯亚型禽流感病毒 的进化呈现出新的特点，做好H3亚型禽流感病毒的流行病学监测和进化研究十分必要。 关键词：家鸭；H3N8；基因；致病性 1 引言 野生水禽是流感病毒的自然宿主，而家鸭在野禽和家禽之间流感病毒的传播中起到了重要的桥 梁作用。目前，16种HA亚型和9种NA亚型的流感病毒都能从水禽体内分离到，然而，分离率最高 的仍然是H3亚型。 H3亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱，能够感染包括禽类以及猪、马和人等哺乳动物。近年， H3N8亚型流感病毒先后在日本和澳大利亚等国的赛马中暴发，导致数十亿的经济损失。同时，研究 资料表明H3亚型哺乳动物流感与禽流感有着紧密的联系，这些H3亚型哺乳动物流感病毒或者部分 或者全部来源于禽流感病毒。1989年以及随后的一年，在中国东北的马群中连续暴发了两次H3N8 亚型流感，基因证据表明该流感病毒的所有基因片段均来源于禽，未经重组由禽直接传播给马群。最 引人注意的是，发生于1968年的香港人类流感大流行的H3N2亚型流感病毒也是来源于禽类，它与 毒具有重要的公共卫生学意义。 etal， 近年来，H3亚型禽流感病毒的流行病学监测及其致病性研究主要集中在中国南方(“u et and 2003；Xueal，2006a 2006b)而缺乏中国北方H3亚型禽流感病毒的相关研究。因此，本文对 分离自2004年～2005年北京市活禽市场的六株鸭源H3N8亚型流感病毒进行了基因的进化分析以 及对鸡和小鼠的致病性研究。 “京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛”论文集名晰 2材料与方法 2．1病毒分离和鉴定 2004年～2005年，在北京市的活禽市场开展禽流感病毒的流行病学监测，采集健康家禽的咽拭 子和泄殖腔拭子。按照常规方法处理拭子样本，并将其接种10日龄鸡胚进行病毒分离。对分离到的 病毒根据世界卫生组织规定采用参考血清进行HA和NA亚型的鉴定。病毒的鸡胚半数感染量 (EID50)测定按照Reed—Muench法进行。 2．2基因和进化分析 RNAIsolation 用RNA提取试剂盒(Total System，PromegaInc．)从病毒尿囊液中提取病毒RNA， PCR 常规方法进行，分别采用片段特异性引物进行扩增。PCR产物用QIAquickpurificationkit(Qia- softwareversion gen)试剂盒进行纯化。用MegAlign 1．03(DNAStarInc．)软件、CLUSTAL_V方法进行 TreeView(version 1．40；Page，1996)．进行进化分析和绘制进化树。本研究进化分析中流感病毒各 片段的起始位置分别是：PB2(nt1345—2202)，PBl(nt1181—1814)，PA(nt630—1229)，HA(nt 11l一731)，NS(nt60—716)。 65—1054)