胶质瘤FasL表达部位的研究.pdfVIP

中文摘要 目 的 属于肿瘤坏死因子家族，它通过与其受体Fas结合诱导 靶细胞凋亡。已经证实FasLFas系统在免疫系统T淋巴 细胞细胞毒作用中起重要作用。FasL对表达Fas的恶性肿瘤细胞 来说是一种细胞毒性效应分子。 有报导曾描述黑色素瘤细胞FasL的表达是免疫逃逸的一个 重要机制。为了研究其FasL的表达，有人使用同样的条件重复上 述实验，却没有发现功能性FasL位于他们所研究的19例人类黑 色素瘤细胞系中。另外，他们用RT一PCR法评估黑色素瘤细胞 系，却发现26例中无一例表达FasLmRNA。通过抗黑色素瘤T细 胞系的激活，FasLmRNA才丰富表达。这些数据不支持黑色素瘤 细胞通过表达FasL来逃触疫反应。) 活化的T淋巴细胞杀死肿瘤细胞是通过分泌FasL，与肿瘤细 胞表面的Fas结合，引起肿瘤细胞凋亡来实现的。但是，多数肿瘤 细胞高表达FasL，同样也可以与T淋巴细胞表面的Fas结合，引起 T淋巴细胞凋亡。临床常见到的现象是:脑肿瘤组织内很少有T 淋巴细胞浸润。我们推测:肿瘤细胞生长的同时，促进毛细血管表 达高水平的FasL，从而抑制了活化的T淋巴细胞向肿瘤组织移 行。 介 法 Hendrik等已证实，通过FACS和免疫组化法，(12/12)所有人 类胰腺癌细胞系Fas表达阳性。然而，即使这样，胰腺癌细胞对重 组的FasL或Apo一1抗体诱导的凋亡是抑制的。这种抑制同胰腺 癌细胞FAP一1mRNA高水平表达相关。FAP一1是Fas相关的磷 酸酶，它可以阻断Fas的凋亡功能。通过各种方法他们提出胰腺 癌细胞系可产生Fast的依据。因为6/6胰腺癌细胞系中含有 FasbnRNA(Mc40洲x，和Mr26,0(℃形式的FasL蛋白)。同样，胰 腺癌组织中，FasL可特异性染色，而基质中无特异性染色。在共 育实验中，胰腺瘤细胞对Fas敏感的JurkatT细胞系表达细胞毒作 用。但这一过程可通过FasL特异性中和抗体所抑制。这一结果 支持最近提出的“相互攻击模型”，该模型是指通过瘤细胞诱导 FasL引起肿瘤反应性T细胞的局部清除。 H.UdoKontny等研究了尤文氏瘤中Fas和FasL的存在与功 能情况。所有尤文氏瘤细胞系的细胞表面都表达Fas。当结合 Fas受体后，其中3个细胞系轻易被杀伤。在用IFN一，和/或cy- clohezimide预先培养后，其中4个细胞系表现出Fas介导的凋亡。 2个细胞系对Fas介导的凋亡是抑制的。至于Fast，所有的细胞 系都呈阳性，并且由RT一PCR进一步证实。然而使用流式细胞分 析，FasL只在细胞渗透后才可检测到。这些细胞系不能诱导Fas 敬感的Jurkat细胞凋亡。尤文氏瘤细胞系能作为产生细胞毒淋巴 细胞的刺激物，且易于被这些淋巴细胞所溶解。所以，尤文氏瘤表 达的FasL是非功能性的，这表明尤文氏瘤对免疫治疗来说是有可 能的。 已往的研究揭示肿瘤组织表达FasL水平的高低往往用的是 单一免疫组化法，此法不能显示高水平的Fast位于肿瘤细胞或肿 瘤内毛细血管细胞。在本实验中，我们采用双重免疫萤光染色方 法来研究胶质瘤内，高水平的Fast位于肿瘤细胞或肿瘤内毛细血 管细胞。 结 果 Joe0Connell等证明SW620结肠癌细硒杀伤JurkatT细胞 是以F朗介导的方式。Fas受体特异反义多核昔肚的处理，可暂时 抑制FasR表达，这样可保护Jurkat细胞被SW620杀伤。FasL特 异反义多核昔肤处理的SW620抑制Jurkat细胞杀伤活动。在鼠 的视网膜和辜丸组织中，FasL作为免疫优先的媒体而存在。他们 发现结肠癌细胞表达功能性FasL，这表明FasL可能是人类肿瘤免 疫逃逸的机制。通过RT一PCR和免疫荧光流式技术，可发现 HT29,SW620结肠癌细胞表达FasRRNA。但是经过抗FasR单抗 CHII处理的这些细胞不发生凋亡。这一结果结肠癌细胞内存在 Fas相互攻击模型。癌细胞抑制Fas介导的T细胞细胞毒作用，但 却表达功能性FasL，活化的T细胞对功能性FasL却是敏感的。 我们收集20例胶质瘤石蜡标本，做针对Fas和FS的双重免 疫荧光染色。我们发现在内皮细胞染色