分离目的基因的方法及原理.pptVIP

目的基因的分离 分离目的基因的方法及原理 目的基因分离方法的选择原则 目的基因的序列测定 目的基因的定义： target gene 对基因组中某一基因成分或该基因片段进行研究 或应用，首先需要通过克隆、扩增以获得该基因， 此基因（或片段）称为目的基因。 外源性基因（或DNA）： cloned DNA in vitro 插入至载体、并导入宿主细胞内复制的基因。 DNA重组技术： 按照人的意愿在体外对 DNA 分子进行重组， 再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中 扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 目的基因的来源 从庞大的基因群中获得某一目的基因的DNA 片段要求 ①纯度高；②数量多 原核细胞（较易获得目的基因） 基因组较小，可直接分离获得 基因组 限制性内切酶 水解成若干 片段 探针筛选 提纯 扩增 真核生物：一个单拷贝基因仅占整个基因组的 10-5甚至更少，不易获得。 真核细胞目的基因的来源根据不同要求选择 1. 构建 cDNA文库 2. 构建基因组文库 3. 人工合成 Synthesize DNA in vitro 4. PCR扩增