PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体拷贝数方法的建立.pdf

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(7): 685–689 http ://www.cj 技术与方法 荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA 拷贝数方法的建立 , , , , , , , , , , 123 123 123 123 123* 孙　懿 　曾思聪 　胡　亮 　卢光琇 　林　戈 1 2 ( 中南大学生殖与干细胞工程研究所, 长沙4 10078; 人类干细胞国家工程研究中心, 长沙4 10078; 3卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室, 长沙4 10078) 摘要 建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNA ND1 β-globin ; 和核单拷贝基因 基因序列的重组质粒作为标准品 收集无饲养层培养体系下人胚胎 DNA , 2 Taqman PCR ND1 干细胞 样本 结合 个单独的 探针实时荧光定量 对待测样本中线粒体 和核 β-globin , DNA , 基因分别进行定量 从而对人胚胎干细胞线粒体 的含量进行了精确定量。结果提示 DNA / 1 321±228 , 人胚胎干细胞线粒体 的平均拷贝数 细胞为 。研究表明 该技术可对人胚胎干细胞 DNA , DNA 线粒体 拷贝数进行准确的测定 为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体 拷贝数的影响及 优化体外培养条件奠定了基础。 关键词 人胚胎干细胞; 线粒体DNA; DNA拷贝数 , ( , mtDNA 线粒体是真核细胞内的重要细胞器 它不仅能 多能性与线粒体功能包括线粒体膜电位 含 , ATP, , ) 维持细胞正常的生理功能 为有机体提供 而 量 调控线粒体复制、转录、发生相关的基因检测 , , 且在细胞凋亡和死亡中也发挥着重要作用。人线 的关系 发现其呈正相关性 首次证实人胚胎干细胞 粒 体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)是全长 为 对体外不同的无饲养层培养的适应性依赖于线粒体 16 569