NAC和雷帕霉素通过抑制镉诱导神经元氧化应激和mTOR通路激活抗凋亡机理的研究。pdf.pdfVIP

1 张振：NAC和雷帕霉素通过扣制镉诱导神经元氧化应激和mTOR通路激活抗凋亡机理研究 摘要 本文通过体外分离培养原代小鼠皮质神经元，运用细胞培养、W|estem bl她 等技术从细胞分子生物学角度，分析N-乙酰．L．半胱氨酸(NAC)和雷帕霉素 (R丑p)干预镉诱导神经元ROS和mTOR通路激活抗凋亡的机制；通过慢性镉 染毒实验小鼠模型，运用既染色、透射电镜和免疫组织化学染色等分析方法， 探究了镉诱发大脑组织和细胞损伤过程中，NAC对其变化效应，综合分析了NAC 拮抗镉诱导神经元介导n1TOR通路激活发挥抗凋亡的机理。结果如下： l NAC和Rap通过抑制镉诱导神经元RoS和mToR通路激活抗凋亡 以原代小鼠皮质神经元为对象，将分离的原代神经元细胞悬液接种在96 h，或用N-乙酰一L-半胱氨酸(NAC，5 州CdCl2处理24 mM)和雷帕霉素(Rap，0．2峙／m1) h或24 预处理lh和48 h。采用M丌法分析细胞活性， h后用10和20山CdCl2暴露4 b10t测定mTOR通路相关 用荧光探针CM．H2DCFDA分析细胞RoS荧光强度。W|estem 信号蛋白变化。我们观察到镉以浓度依赖的方式诱导神经元凋亡，这与镉诱导ROS 靶向特异抑制剂脚预处理，可以通过阻滞ROS产生和mTOR通路激活，明显 削弱镉诱导的神经元凋亡。提示：NAC和Rap通过抑制镉诱导神经元ROS和 m，rOR通路激活抗凋亡。 2 NAC对慢性镉染毒实验小鼠大脑组织和细胞损伤的保护作用研究 选用健康成年ICR小鼠64只，分为对照组(0．9％生理盐水)和镉处理10、 25或50 mg／LCdCl2处理组诱发小鼠大脑组织和细胞损伤，及NAC组，NAC加 10、25或50 mg／LCdCl2处理组观察保护情况，共8组。镉采用自由饮水方式， NAC溶于生理盐水(15 m酌：n1)按150mg／1【g体重，每隔1天腹腔注射，连续4 周。采用常规既染色观察组织学变化和透射电镜TEM观察细胞超微结构变化， 以及免疫组化分析4E．BPl磷酸化表现。结果表明：在光学显微镜下，大脑皮层 和海马区组织结构的变化，大脑颞叶皮层三层结构(CPl．3)出现明显的混乱等 摘要 2 细胞松动现象，细胞异常集中在中间带，且以镉浓度依赖的方式呈现大脑颞叶皮 层结构不清，部分神经细胞核固缩，出现筛网状结构；海马区CAl一CA2区细胞 异位，呈空泡样变性，海马齿状回明显松散，细胞间出现间隙。而NAC和Cd 联合处理组的小鼠在皮层组织学结构上可以看到NAC明显的保护作用，小鼠大 脑皮层三层结构明显。海马结构齿状回颗粒细胞密集，排列均匀，CAl一CA2区明 显。透射电镜观察皮层神经细胞内胞体缩小，神经元细胞内细胞器结构紊乱，线 的方式在海马CAl区表达，大脑皮层犹以底板层的I～Ⅲ层更为密集，海马区 阳性细胞沿海马齿状回颗粒细胞层呈线状排列，细胞呈圆形，均匀深染，NAC 对小鼠大脑皮层额叶分子层的I～Ⅲ层和海马CAl区4E．BPl磷酸化有明显的保 护作用。提示：NAC干预了慢性镉染毒实验小鼠大脑皮层和海马区组织结构变 化和m]旧R通路激活。 关键词：镉；小鼠；神经元；N．乙酰．L．半胱氨酸；雷帕霉素；mTOR；大脑皮层； 海马；4E．BPl 张振：NAC和雷帕霉素通过扣制镐诱导神经元氧化应激和mTOR通路激活抗凋亡机理研究3 Summary The studiedw弱di访ded