大专生物化学课件(新)-氨基酸性质和制备.ppt

问题七：如何分离氨基酸？ 沉淀分离法 溶解度法 等电点法 特殊试剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 吸附法 活性炭法 离子交换树脂法 膜分离法 萃取法 结晶法 电泳法 沉淀分离法 （1）溶解度法 ：依据不同氨基酸在水中或其他溶剂中的溶解度差异而进行分离的方法。 胱氨酸/酪氨酸，酪氨酸易溶于热水。 （2）等电点法：根据氨基酸的等电点不同，在等电点时，氨基酸分子的净电荷为零，有利于氨基酸分子的彼此吸引而形成结晶体沉淀下来。 通过调节溶液的pH值，可以分离等电点差异较大的氨基酸 沉淀分离法 （3）有机溶剂法：是利用某种有机溶剂使需要提取的物质在溶液中的溶解度降低而形成沉淀。 沉淀分离法 （4）特殊试剂沉淀法 ：采用某些有机或无机试剂与相应氨基酸形成不溶性衍生物的分离方法。 精氨酸与苯甲醛生成沉淀，盐酸去除苯甲醛 是最早应用于混合氨基酸分离的方法之一。某些氨基酸可以与一些有机化合物或无机化合物结合，形成结晶性衍生物沉淀，达到与其它氨基酸分离的目的，但是，特殊沉淀法的沉淀剂回收困难，排放废液中参杂有沉淀剂，加重了污染，残留在氨基酸产品中的沉淀剂还会影响纯度。 吸附法 吸附法-离子交换法 吸附法-离子交换法 氨基酸是一种两性电解质，在酸溶液中，氨基酸以阳离子状态存在，因而能被阳离子交换树脂交换吸附;在碱性溶液中，氨基酸能以阴离子的状态存在，因而能被阴离子交换树脂吸附。根据氨基酸分子中既有氨基又有羧基的两性电离特性，分子中侧链基团(R)的性质和等电点的范围，调节氨基酸混合液的PH值，选择恰当的离子交换树脂，配合相应的交换基团，可以从混合氨基酸中分离出酸性、碱性和中性氨基酸。 膜分离法 膜分离法 国外膜分离工艺已应用于乳制品工业。采用反渗透浓缩乳清，使用超滤法从乳清中制备浓缩蛋白质，使用微米膜分离乳清中的蛋白质，去除脱脂乳中的细菌，使用纳滤膜去除乳清中的矿物质。近些年，又开始研究膜过滤分离蛋白质、肽和氨基酸的可行性。在人体的新陈代谢过程中存在大量生物膜渗透现象。研究氨基酸的膜分离不仅可以找出有效的生物分离技术，而且有助于加深对这些新陈代谢过程的了解。 萃取法 萃取法 近年来,采用溶剂萃取法分离氨基酸的研究报道很多,但大多是提出了专利申请,或处于研究阶段,未见工业报道。要实现工业化,至少要先解决两个问题: 其一是萃取过程中乳化的问题。 其二是低毒萃取剂的选择和萃取剂残留物对于产品质量的影响。萃取法用于处理发酵液,也取决于新方法在收率上与原来的方法相比较能够获得多大的经济效益。 电泳法 两性解离性质及等电点 ★氨基酸的等电点(pI)：氨基酸的净电荷为零时所处溶液的pH值。 意义：氨基酸处于等电点时，其溶解度最小，最易沉淀。此性质常用于分离制备特定的氨基酸。 作业三：“氨基酸的等电点”的定义是什么？写出氨基酸两性电离的通式。 两性解离性质及等电点 补充：pI的计算 pK值（解离常数）： 指某种解离基团有一半 被解离时的pH值 pI=(pK1+pK2)/2 化学反应1：与茚三酮的显色反应 α-氨基酸与水合茚三酮溶液共热，引起氨基酸氧化脱氨、脱羧，水合茚三酮与反应产物（氨、还原型茚三酮）生成蓝紫色产物（脯氨酸Pro和羟脯氨酸Hyp呈黄色） 反应受溶液pH值影响。产物色深与溶液中氨基浓度成正比。 该反应可用于定性和定量检测氨基酸 化学反应1：与茚三酮的显色反应 化学反应2：与甲醛反应 反应： 氨基酸与甲醛反应生成羟甲基、二羟甲基氨基酸，同时释放H+。 化学反应2：与甲醛反应 应用：可促进氨基酸两性离子中-NH3+解离，从而使滴定终点pH值下降2~3个单位。使用此法后，可以用NaOH滴定氨基酸中的羧基氢离子，以测定氨基酸的浓度。 此方法被称为“甲醛滴定法” 是构成生物体蛋白质的基本单位 直接参与生物体内的新陈代谢和其他生理活动 人工合成激素、肽、氨基酸衍生物等的重要原料 定性鉴别溶液中是否含有氨基酸/样品是不是氨基酸 茚三酮显色法 定性鉴别溶液中是否含有某种氨基酸/样品是不是某种氨基酸 薄层色谱法 结晶法 需要已知样品作为对照 定性鉴别溶液中是否含有某种氨基酸/样品是不是某种氨基酸 利用某些氨基酸的特殊反应、特殊性质，如： 脯氨酸，羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色 酪氨酸，色氨酸，苯丙氨酸在280nm左右有光吸收 其他化学反应 米伦反应：酪氨酸与米伦试剂（硝酸汞溶于含有少量亚硝酸的硝酸中）反应即生成白色沉淀，加热后变成红色。含有酪氨酸的蛋白质也有此反应； 坂口反应：在碱性溶液中，胍基与含有?萘酚及次溴酸盐的试剂反应，生成红色物质。这是对于精氨酸专一性较强、灵敏度较高的一个反应； Pauly反应：组氨酸的咪唑基在碱性条件下，可与重氮化的对氨基苯磺酸偶联产生红色物质。酪