MAT2A基因小干扰RNA诱导人肝癌细胞凋亡分子机制.pdfVIP

维普资讯 ISSN l007．7626 中国生物化学与分子生物学报 2006年 7月 CN 11-3870／Q ChineseJournal ofBiochemistryandMolecularBiology 22(7)：575～583 MAT2A基因小干扰 RNA诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制 刘权焰¨，刘志苏 ，邬开朗 ，朱 应 ，何跃明¨，吴建国 (”武汉大学中南医院普外科 ，武汉 430071；武汉大学生命科学院现代 医学病毒室 ，武汉 430072) 摘要 为探讨 甲硫氨酸腺苷转移酶 2A(MAT2A)小干扰 RNA对人肝癌细胞生长和细胞凋亡 的影响 及其机制，采用脂质体转染法将 MAT2A小干扰 RNA质粒表达载体转 染人肝癌 细胞 系Bel一7402细 胞、HepG2细胞和 HepG3B细胞 ．半定量 RT—PCR检测 MAT2AmRNA表达 。Western印迹检测 MAT2A 蛋白质表达 ，M1Tr法观察 MAT2A小干扰 RNA对肝癌细胞生长的影响，流式细胞仪及 DAPI染色检 测 siRNA对肝癌细胞凋亡的影响．为探讨其作用机 制，进一步检测转染后肝癌细胞 MAT的活性 、 MAT1AmRNA表 达及 SAM、SAH含 量 ．结果发 现 ，MAT2A小干扰 RNA特异 性抑 制人肝 癌 细胞 MAT2AmRNA和蛋白质的表达 ，刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变，降低 了肝癌细胞 中MAT Ⅱ活性 (P0．05)，从而诱导肝癌细胞凋亡 ；MAT2A小干扰 RNA诱导 Bel一7402细胞 、HepG2细胞 、 Hep3B细胞凋亡指数分别为 19．3％ ±2．8％、22．8％ ±3．5％、21．8％ ±4．2％。较对照组 siRNA(凋亡 指数为 5．2％±1．9％)具有明显差异 (P0．05)．DAPI染色显示，MAT2A小干扰 RNA转染组可见 多个细胞核浓缩、碎裂成蓝色的小块状 ，染色质凝聚，形成典型的凋亡小体 ，而对照 siRNA转染组 未发现典型的凋亡 小体 ．肝癌 细胞 的生 长也 受到抑制 ，MAT2A小干扰 RNA转 染 Bel一7402细胞 、 HepG2细胞、HepG3B细胞 72h后，细胞生长抑制率达 高峰 ，分别为 39．62％、41．27％、38．84％．肝 癌细胞 中SAM含量明显升高(P0．01)，而 SAH含量改变不明显 ，SAM／SAH变化伴随SAM含量变 化而改变．提 示靶 向 MAT2A基 因的 siRNA通过 升 高肝 癌 细胞 中 SAM含 量，刺 激 MAT表 达 由 MAT2A向MAT1A转变，从而诱导肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞生长 ． 关键词 siRNA；肝肿瘤 ；MAT2A；细胞凋亡 中图分类号 R735．705 SilencingofMAT2A GenebyRNA InterferenceResultedin InductionofApoptosisinHumanHepatomaCells LIUQuan—Yan”，LIUZhi—Su” ，WUKai—Lang2，ZHUYing2，HEYue—Ming ，WUJian—Guo2 (”DepartmentofGeneralSurgery，ZhongnanHo~itd，WuhanUniversity，Wuhan 430071，China； ”KeyLaboratoryofVirology，Min~try ofEducation，CollegeofLfieSciences，WuhanUniversity，Wuhan 430072，China ) Abstract ToinvestigatetheeffectofMAT2A ongrowthandapoptosisofhepatomacellsbysmallinterfering RNA (siRNA)targetingthegene，theexpressionvectorpSilence一2．1一U6一siRNA wereconstructedandshort interfe