基于蛋白质组学的猪链球菌2型反向疫苗学研究.pdfVIP

第三届猪病防控学术研讨会会议论文集 型荧光定量PCR诊断方法，与常规PCR方法相比，该方法更加迅速，整个反应可在l~2个小时内完成， 而且不需要电泳从而极大降低了对环境的污染，其检测灵敏度是常规PCR方法的100倍(图2)，并 做到了对样品的实时定量检测。该方法对于SS9的早期快速诊断、疫苗免疫及防控等具有重要意义。 板设计探针和引物，在特异性方面具有双重保证，因此具有比常规PCR更高的特异性。经特异性实 验和重复性实验，证明所建立的FQ-PCR方法具有很高的特异性，可用作SS9的快速诊断和分型研究 值呈现有规律的增加，DenaRn值均较高，而且对同一样品重复4次检测均可得剑一致的Ct值和荧光 强度，表明所建立的FQ-PCR方法具有很高的敏感性和重复性。 利用FQ．PCR方法进一步对临床ll份疑似猪链球菌感染扁桃体组织样品和标准SS9型株进行检 测，结果与常规PCR方法检测结果完全一致，说明该方法可成功用于SS9型病的临床应用检测；同时 也暗示，在我国猪群感染猪链球菌的病例中存在SS9型感染的情况。因此建议临床上在重视SS2感染 控制的同时，还应该加强SS9型感染的防控。 综之，本研究在国内外首次成功建立了SS9型猪链球菌的荧光定时PCR诊断方法，并对临床组织 样品进行了成功检测，为以后SS9型的快速诊断、血清学分型、疫苗免疫及猪链球菌综合防控等方面 的研究奠定了基础。 参考文献(略) 基于蛋白质组学的猪链球菌2型反向疫苗学研究素 张安定”，谢春艳，陈博．金梅林一，陈焕春1 (华中农业大学动物医学院预防兽医学实验室。武汉，湖北，430070) 摘要猪链球菌2型是一种重要的人言共患病原茵．目前该病的预防主要使用灭活疫苗，但灭活疫苗缺乏交叉保 护，且有效成分不清．因此本研究使用免疫蛋白质组擘的方法从猪链球茵2型的细胞壁蛋白种筛选免疫原性蛋白。 共鉴定了34种免疫原性蛋白，其中15个蛋白可以为所有的免疫血清和康复血清所识别．将免疫原性蛋白重组表达， 型疫苗的研究奠定了重要的基础． 猪链球菌2型是一种重要的人畜共患病原菌。灭活疫苗在预防相同血清型的细菌感染具有很好 的效果。但对于不同血清型则缺乏交叉保护111．对于许多G+细菌而言，其外部结构，尤其是细胞壁 相关蛋白在细菌的粘附等致病过程中发挥重要作用，同时被动免疫在SS2的保护性应答方面具有重 要意义121。因此利用SS2阳性血清可以从SS2细胞壁相关蛋白中筛选到保护性抗原，从而鉴定SS2 疫苗的有效抗原成分，为新型疫苗的研究奠定必备的基础。 1材料和方法 1．1菌株 本试验所用菌株为猪2型链球菌2005年四川资阳分离株。 1．2 猪2型链球菌细胞壁相关蛋白(m)的制备 猪2型链球菌细胞壁相关蛋白的提取参考Quiberoni描述的方法进行。 1．3双向电泳分析 1·基金项目7国家科技支撑计划项目(2006BAD6AIlI)． ¨作者简介：张安定(1978-)，男，湖北宜昌，博士生，主要从事动物传染病研究． 细菌病 主要使用GEHealthcare公司的仪器进行． 1．4蛋白克隆表达 Western．blot试验。 1．5蛋白保护力试验 分别使用纯化的蛋白免疫小鼠2次。10天后使用20LD50的剂量进行攻毒以检测蛋白的保护力。 2结果与分析 2．1免疫原性蛋白的筛选鉴定 将双向电泳分离的猪2型链球菌细胞壁相关蛋白，分别使用疫苗免疫血清、自制康复期血清以 及临床康复期血清做杂交，通过质谱分析，共鉴定了34种免疫原性蛋白，其中15个蛋白可以为所 有的阳性血清所识别，其中包括了在SS2中高丰度表达的MRP、以及新近鉴定的具有很好免疫保护 力的蛋白SAO。 2．2保护性抗原的筛选 将筛选的26个免疫原性蛋白重组表达纯化，并将表达蛋白免疫小鼠，进行攻毒试验。发现 HP0197、HPl036、PE可以保护小鼠抵抗20LD∞的攻击，最具有发展为疫苗的潜力。 参考文献(1lt) 猪链球菌病的诊断与防制 苏双 (吉林省兽医科学研究所吉林长春130062) 猪链球菌病自上个世纪五十年代发现以来，许多养猪国家和地区都有发生的报道。我国自上世 纪九十年代