猪抗菌肽的表达与调控研究.pdfVIP

56 02009年学术年会 TY01002 猪抗菌肽的表达与调控研究 汪以真 (浙江大学饲料科学研究所 生物饲料安全与污染防控国家工程实验室 动物分子营养学教育部重点实验室 浙江杭州 310029) 饲用抗生素的长期使用会导致其在动物性产品中的残留、耐药菌株的产生，对人体健康和生态环境 将造成严重威胁。因此，研制安全、高效、环保型防病保健促生长添加剂的任务已迫在眉睫。抗菌肽是 动物体内极为重要的先天免疫物质，是一种具有高效抗菌、抗病毒、免疫功能的生物活性因子。研究表 明，抗菌肽有着与传统抗生素不同的作用机制，不易诱导耐药菌株的产生；其抗菌谱广，对细菌、真菌、 病毒、原虫及癌细胞均有作用；此外，还具有稳定、水溶性好、对高等动物正常细胞几乎无害、在体内 基本无残留等特点。抗菌肽的前期研究工作主要集中在抗菌肽的结构和功能、抗菌肽的作用机制等方面， 然而目前饲用抗菌肽的研制和应用仍存在一些技术难题：一是抗菌肽的分子改良；二是提高抗菌肽的表 达量；三是深入研究抗菌肽在动物上的应用效果及机理。因此，抗菌肽的下一步研究重点将是：开展饲 用抗菌肽分子设计与改良、抗菌肽高效表达和产业化生产技术及应用研究，研制出对饲料及动物肠道中 主要致病菌具有高效杀灭作用且能明显提高动物抗病力的饲用抗菌肽产品。 1动物抗菌肽的研究进展 瑞典斯德哥尔摩大学Boman等人于1974年从美国惜吉比天蚕蛹中首次获得抗茵肽【lJ，自那时起， 具有的天然免疫力与其体内分泌的多种抗菌肽有关。进一步研究表明，除昆虫外，哺乳动物嗜中性粒细 胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板、骨髓、脾脏和上皮细胞等中都可以表达分泌多类抗菌肽，它们是动 物抵抗外来细菌病毒入侵的第一道屏障，它们能识别和杀灭这些入侵并植被在动物机体内的有害微生 物，在动物非特异免疫机制上发挥重要作用睁71，对确保动物特别是幼龄动物健康具有重要意义。 1．1抗菌肽的结构和功能 根据抗菌肽的空间结构可将其分为螺旋结构、富含某一氨基酸残基的延伸螺旋结构(无半胱氨酸)、 分子C末端有一个二硫键结构和B片层结构四大类。这些抗菌肽虽然空间结构各不相同，但它们的一 级结构却具有以下共同特征：一是N端富含亲水性的碱性氨基酸残基使抗菌肽呈阳离子特性；二是活 性结构为两亲极性。酰胺化的C端富含疏水性的非极性氨基酸；中间连接部分富含脯氨酸，末端大多 1-2、PMAP．23、 环状螺旋和D一折叠等类型。猪Cathelicidins家族包括PR一39、Protegrins1-5、Prophenin PMAP．36、PMAP一37。 特邀专题报告 057 研究发现，多数抗菌肽对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有高效广谱的杀菌活性，有些抗菌肽对 真菌、病毒和原虫也有明显的杀伤作用，而且对癌细胞和实体瘤有攻击作用，但不破坏正常细胞。 Defensins对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和一些具包膜病毒都有杀伤作用，比较而言，对革兰 摩尔浓度能有效杀灭细菌，对革兰氏阴性菌和阳性菌，如大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、铜绿假单胞菌、粪 肠球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等具有很强的杀菌作用，另外对真菌如白色念珠菌、隐球菌和包膜病 毒和寄生虫都有较好的杀灭作用。PR一39主要作用于革兰氏阴性菌，并能促进伤口愈合以及抑制肝癌细 mM的浓度即可杀灭细菌， 对革兰氏阳性菌和阴性菌均具有显著的杀灭作用。其中，PMAP．37在0．2～l mM和10～50 mM的PMAP一37对人红细胞 PMAP．23和PMAP一36的MBC则为l～10mM，但10～50 具有溶血作用，而当PMAP-23和PMAP-36浓度达到100mM时仍无溶血现象111l。 然而有些抗菌肽的抗菌活性仍不够理想或具有较高的溶血活性，因此需要对其进行分子改良。就目 前对抗菌肽结构与生物活性关系的研究结果来看，对抗菌肽进行