重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达.pdfVIP

第 29卷第 9期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 29 , No. 9 806 2007年 5月 　　ACTA 　ACAD EM IA E　M ED IC INA E　M IL ITAR IS　TER TIA E　　 M ay. 2007 论著 文章编号 :(2007) 重组 V IP腺病毒载体的构建及其在 293 细胞的表达 ( ) 宋 　敏 , 白　云 ,段文元 ,章 　波 ,杨晓亚 ,许雪青 　　 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室 ,重庆 400038 　　提 　要 : 目的 　构建血管活性肠肽重组腺病毒载体 , 以期用于体 内实验研究 。方法 　利用 R TPCR 扩增小鼠大脑 V IP mRNA ,亚克隆到穿梭质粒 pA dTrackCMV ,在 pA dea sy 内同源重组 ,筛选阳性克隆 ,酶切 、测序鉴定正确 ,线性化后脂 质体法转染 293 细胞进行包装 、扩增 ,利用报告基因 EGFP对病毒滴度进行监测 。PCR、免疫荧光鉴定 pA dea syV IP感染 293 细胞后 V IP基因的表达 , EL ISA 检测重组病毒转染后 293 细胞上清中的表达 。结果 　测序 、酶切证实 V IP基因重组 腺病毒载体构建成功 。R TPCR ,免疫荧光检测 pA dea syV IP病毒感染的 293细胞 ,均有 V IP 的表达 。与对照组相比 ,重 组病毒转染后 293细胞上清中 V IP 多肽的表达明显增高 。结论 　成功构建了含小鼠 V IP基因的重组腺病毒载体 ,并成 功表达 V IP 多肽 。 　　关键词 : 血管活性肠肽 ;腺病毒 ;基因治疗 　　中图法分类号 : R392. 11; R39433; R394. 2　　　 文献标识码 : A Con struction, expression and iden tif ica tion of recom b inan t adenov irus A dV IP in 293 cells SON G M in , BA I Yun , DUAN W enyuan , ZHAN G Bo, YAN G X iaoya, XU Xueqing (D ep artm en t of M edical Genetic s, College of M edicine, Th ird M ilitary M edical U n iversity, Chongqing 400038, Ch ina) 　　A b stract: O bje c tive 　 To con struct a recom b inan t adenoviru s encoding va soactive in te stinal p ep tide (V IP) for fu tu re gene therap y in vivo. M e tho d s　Fu ll length mou se V IP cDNA linked w ith an in ternal ribo som e en try site ( IR ES) EGFP ca ssette wa s subcloned in to pA dTrackCMV shu ttle p la sm id.