斑点免疫金渗滤法快速检测磺胺甲噁唑残留.pdf

摘 要 本研究制备了三种磺胺药的多克隆抗体 建立了快速检测磺胺甲噁唑的斑点免疫金 渗滤法 为该技术在畜产品中磺胺药残留检测上的应用奠定了基础 研究结果如下: 分别以HSARSA为载体用重氮化法合成人工免疫原SMZHSASNHSASDM-HSA 及SMZ-RSA,以OVA为载体合成相应的包被原 经紫外扫描和高效液相色谱分析 表明合 成成功 用合成的SMZ-HSA免疫原免疫鼠和兔 SNHSASMZ-RSA及SDM-HSA三种免疫原免 疫兔 所得抗血清经琼脂扩散试验测定其效价分别为 1:321:161:161:81:16 ELISA法测定其效价依次为 1:5120001:2560001:2560001:640001:320000经 ELISA法检测四种兔多抗与OVA均无交叉反应 间接竞争 ELISA试验表明, SMZ-HSA兔多抗 SMZ-RSA兔多抗 SN-HSA兔多抗和 22.442ng/ml SDM-HSA兔多抗检测相应药物的灵敏度分别为 46.618ng/ml 14.0086ng/ml73.9970ng/ml与7种同类药物的交叉反应率最高达6.9% SMZ-HSA抗血清经饱和硫酸铵沉淀法粗提后 葡聚糖凝胶G200柱分子筛层析 收集 主峰蛋白 经SDS凝胶电泳鉴定 只有一条带 说明其为电泳纯 用SMZ-HSA鼠多抗包被硝酸纤维素膜 NC膜 用SMZ-HSA纯化兔多抗与柠檬酸钠 法制备的胶体金标记 制备金标蛋白复合物 建立了检测SMZ残留的斑点免疫金渗滤法 DIGFA该法简便 快速 灵敏度可达2.5ng/点 方法的特异性 重复性都较好 DIGFA 检测方法与高效液相色谱法的符合率为 93.01%说明该检测方法确定的灵敏度是可信 的 关键词:磺胺甲噁唑 多克隆抗体 斑点免疫金渗滤法 3 Dot-immunogold Filtration Assay for Rapid Dectection of Sulfamethoxazole Residues Jiang Hong(veterinary pharmacology ) Surpervised by professorWu Guo-juan and Huang Yan Abstract Polyclonal antibody(PcAb) of Sulphamethoxazole(SMZ),Sulfanilamide(SN),Sulfadimethoxine(SDM) were prepared, The establishment of dot-immunogold filtration assay(DIGFA) for rapid dection of sulfamethoxazole residues would be a base for the use of DIGFA in dectecting residues of sulfanomides. Hapten SMZ,SN,SDM were conjugated to human serum albumin (HSA),ovalbumin OVA or rabbit serum albumin(RSA) by diazotization for preparing complete antigen SMZ-HSA, SMZ-RSA, SN-HSA, SDM-HSA, SMZ-OVA, SN-OVA, SDM-OVA. The results showed a successful coupling occurrence with ultraviolet(UV) scanning spectrum and high performan