肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌的表达和纯化.pdfVIP

广东药学院学报 JournalofGuangdongPharmaceuticalUniversity Oct．2012，28(5) 肠道病毒7l型外壳蛋 白VP1在大肠杆菌的表 达和纯化 吴亚安 ，邓丽芬 ，龚雨婷 ，‘陈端萍 ，谢端 ，肖承荣 ，蔡陈殉 ，赵晓蓉 (1．广东药学院公共卫生学院；2．广东省分子流行病学重点实验室，广东 广州510310) 摘要：目的分析重组肠道病毒 71型外壳蛋 白VP1(EV71VP1)在大肠杆菌的表达及其部位，纯化重组蛋 白VP1，为后续制备抗VP1单克隆抗体奠定基础。方法 采用异丙基]8一D一硫代吡喃半乳糖苷 (IPTG)诱 导VP1在质粒转化菌BL21中的表达 ；用Ni—NTA亲和层析柱对重组蛋 白进行纯化，并用 SDS和 Westernblot分析VP1的表达形式和抗原性 ；优化EV71VP1原核表达条件。结果 SDS—PAGE检测结果 表明重组蛋白主要以包涵体形式存在，纯化后的VP1为一单一条带 ，相对分子质量约36000，与预期大 小相符 ；Westernblot检测证实该蛋白能分别与兔抗EV71外膜蛋白和兔抗His—tag多克隆抗体发生特异 性结合，其最佳表达条件为 37℃，1．25mmolZLIPTG诱导4h。结论 原核表达了EV71VP1，经纯化复 性后