热量限制对心肌细胞SIRTs表达的影响.pdfVIP

汕头大 医 院硕士 位论文 中文摘要 目的： 1. 研究SIRTs （SIRT 1-7 ）在大鼠心脏组织及H9c2 心肌细胞的定位； 2. 初步探讨热量 制对心肌细胞SIRT 1-7 表达的影响。 方法： 3个月龄健康雄雌SD大鼠20只，随机分成两组：① 正常对照组（ad libitum，AL ）（n= 10）： 随意进食；② 热量 制组（Calorie Restriction ，CR ）（n=10 ）：喂养量为对照组的60%，分 别称体重。饲养3周后称体重，用质量分数2 % 的戊巴比妥麻醉后处死，取出心脏，称重， 沿心脏纵轴平均分为三份，心尖及心底部用于Western blot，对比两组 SIRT 1-7蛋白表达水 平的变化；中间部分心脏用于免疫组织化学，定性检测 SIRT 1-7 在大鼠心脏组织的定位。 大鼠心肌细胞株H9c2 在含葡萄糖4 .5g/L 的DMEM 培养基中培养48h 后传代随机分为 两组：①正常对照组（Control，Con）：继续在含葡萄糖4 .5g/L 的DMEM 中培养；②热量 制组（CR ）：弃去旧培养液，加入含葡萄糖 1g/L 的DMEM 。两组细胞在5% CO2 、37 ℃条件下继续培养 24h 后终止。免疫细胞化学法定性检测 SIRT 1-7 在 H9c2 的定位； RT-PCR 法检测SIRT 1-7 mRNA 表达水平的变化。 结果： 1. 实验前两组大鼠两两体重的差别无统计学意义。心脏质量指数（HMI ）=心脏重量/ 大鼠体重。实验后CR 组大鼠体重及HMI 均显著低于 AL 组（p 0.05 ）。 2. 免疫组织化学法检测SIRT1-7 在大鼠心肌细胞定位，结果表明：SIRT1 在细胞核及 细胞质均有大量表达，以细胞核表达为主；SIRT2 、SIRT3 、SIRT4 、SIRT5 主要在细胞质 表达；SIRT6 、SIRT7 在细胞核及细胞质均有表达，主要在细胞核表达。 3. 免疫细胞化学法检测SIRT1-7 在H9c2 细胞表达定位，结果表明：SIRT1 、SIRT2、 SIRT7 在细胞核及细胞质均有表达，以细胞核表达为主；SIRT3 、 SIRT4 、 SIRT5 、SIRT6 - I - 汕头大 医 院硕士 位论文 在细胞质表达为主。 4. Western Blot 法检测热量 制对大鼠心肌细胞SIRT 1-7 蛋白表达水平的影响，结果表 明：CR 组SIRT1 ，2 ，3，4 ，7 蛋白表达水平与AL 组比较显著增加 （p 0.05 ）；SIRT5 ，6 的蛋白表达在两组中没有差异。 5. RT-PCR 法检测热量 制对H9c2 细胞SIRT 1-7 mRNA 表达水平的影响，结果表明： 其变化与大鼠心脏SIRT 1-7 蛋白表达水平的变化一致。SIRT1 ，2 ，3 ，4 ，7 mRNA 表达水 平与正常对照组比较明显增加 （p 0.05 ），SIRT5 ，6 mRNA 的表达在两组中没有差异。 结论： 1. 在心肌细胞中，SIRT1 在细胞核及细胞质均有大量表达，以细胞核表达为主；SIRT2 ， 3，4 ，5 主要在细胞质表达；SIRT6 、SIRT7 主要在细胞核表达。 2. 热量 制可同时激活心肌细胞SIRT1 ，2 ，3，4 ，7 ，而对SIRT5 ，6 的表达没有影响； 初步推测热量 制对心肌细胞的作用可能与SIRT1 ，2 ，3 ，4 ，7 表达的上调有关。 关键词 热量 制；SIRTs；心肌细胞 - II - 汕头大 医 院硕士 位论文 Abstract Objective 1. To investiga