适于固定化细胞内底物有效扩散系数测定的无反应发生条件pdf.pdfVIP

第 39 卷　第 3 期 . 39　 . 3 ( ) V o l N o 厦门大学学报 自然科学版 　2000 年 5 月 ( ) M ay 2000　 Jou rnal of X iam en U n iversity N atu ral Science 文章编号:(2000) 适于固定化细胞内底物有效扩散系数 测定的无反应发生条件 李　薇; 陈学云; 李清彪 ( 厦门大学化工系, 福建 厦门　361005) 摘要: 在无反应发生条件下进行组分在固定化细胞内有效扩散系数测定时, 常常要使细胞失去活 性. 通过显微镜形态观察及重量变化测定, 分析了常用的几种失活细胞的方法对细胞本身的影响. 测 定了由各种不同方式得到的无活性固定化细胞内葡萄糖与乙醇的有效扩散系数, 并与有活性固定 化细胞内组分的有效扩散系数进行了比较. 提出了一种方便于使用, 既可保护底物不被消耗, 又可以 测得更接近实际值的有效扩散系数的无反应发生条件: 苯甲酸处理法. 关键词: 有效扩散系数; 固定化细胞; 苯甲酸; 葡萄糖 中图分类号: TQ 021. 4 文献标识码: A 　　　　　　　　　　　　　　　 底物和产物在固定化细胞内的有效扩散系数是分析生物化工实验数据及设计生化反应器 的一个重要参数, 国内外有关有效扩散系数的研究报导还不多, 这类数据的获得主要还依赖于 实验测定. 实验测定有效扩散系数D e 可以在两种条件下进行, 一种是反应与扩散同时存在; 另一种是测定时没有反应发生. 前一种条件需要有关细胞的反应动力学知识并要求解反应扩 散模型,D e 的求取是麻烦的而且容易受到更多因素的影响, 因此大多数对D e 的研究选择了后 一种条件. 当采用后一种条件进行D e 测定时, 有以下几种方法使得底物不被消耗: 一种做法 [ 1 ] 是使细胞失去反应活性 ; 另一种做法是利用与底物分子量及分子结构相同或相近的替代物 ( ) [ 2 ]; 第三种做法是对于多底 不被细胞所转化 来测定而细胞保留有活性, 如用木糖替代葡萄糖 [ 3 ] 物反应分别测定在缺乏另外其它底物的条件下, 某一底物在固定化细胞内的有效扩散系数 . 第三种做法对于单底物反应显然是不合适的, 第二种做法常常受到类似物不易寻找等因素的 [ 4 ] 限制, 相比之下, 第一种做法更加常用. 使细胞失活有许多方法 , 用于D e 测定时文献报导的 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 方法有: 氧化汞或紫外光波 杀死微生物细胞, 用有机溶剂如甲苯 、乙醇溶液杀死细胞 , 高 [ 8, 9