w-第1章 第1节 基因工程概述2 基因工程的一般过程与技术 导学案2 打印.docVIP

高二生物选修3 导学提纲2 3-1-1 基因工程概述2 基因工程的一般过程与技术 导学案 【学习过程】基因工程的基本过程 一、获得目的基因（目的基因的获取） 1.获取方法主要有两种： （1）、从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 提示：受体菌在培养基上以菌落形式存在，每一个菌落都由一个细胞繁殖而来，携带着同种基因，可以利用目的基因的有关信息，找到目的基因所在菌落，然后再进行提取。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ②种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因，可由mRNA反转录而来 ③目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 （2）、用人工的方法合成。 ★获得原核细胞的目的基因可采取 ，获取真核细胞的目的基因一般是 。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 例1 下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( ) ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ 2.人工合成法——利用PCR （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA双链复制 （4）原料：模板DNA；RNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 （5）方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。 （6）过程：第一步：加热至90～95℃ DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 （7）特点：指数形式扩增=2n(n为扩增循环的次数) 制备重组DNA分子（基因载体 2．启动子：位于基因的 ，它是 的部位，驱动基因转录产生mRNA。 3．终止子：位于基因的 ，终止 。 4．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；使目的基因 ___和发挥作用。 5．标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 6．不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。 方法： 限制酶分别切割载体和目的基因，再用 把两者连接。 例2、科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。由以上过程推知，作为目的基因的运载体应具备的结构是( ) A．目的基因、启动子 B．目的基因、终止子 C．目的基因、启动子、终止子 D．目的基因、启动子、终止子、标记基因 三、转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞） 1.转化的概念：常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 (2)基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 (3)花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我的的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的） b、将目的基因导入动物细胞：最常用的方法将目的基因导入微生物细胞：首先要检测 2.其次还要检测 3.最后检测有时还需进行一球蛋白的DNA D．合成苯丙羟化酶的DNA片段 12．基因工程的正确操作步骤是 ( ) ①构建基因表达载体 ②将目的基因导入受体细胞 ③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求 ④取目的基因 A．③②④① B．②④①③