石油污染土壤的生态风险评价和生物修复Ⅰ.一株具有乳化石油能力的细菌分离鉴定.pdfVIP

第43卷第3期 土壤学报 V01．43．No．3 2006年5月 ACTAPEDOLOGICASINICA May，2006 石油污染土壤的生态风险评价和生物修复* I．一株具有乳化石油能力的细菌分离鉴定 刘五星1，2 骆永明1，2卡 滕 应1 李振高1 吴龙华1 (1中国科学院南京土壤研究所土壤与环境生物修复研究中心，土壤与农业可持续发展国家重点实验室，南京210008) (2中国科学院研究生院，北京100039) 摘要 以江汉原油为唯一碳源，经过BH培养基富集培养，以血平板从不同石油污染土壤中分离纯 h、24h的 化获得多株细菌。通过测定这些细菌对柴油的乳化程度，发现菌株X13—1具有较强乳化能力，其1 乳化率分别为80％和75％，明显高于文献报道。此外，该菌在以石蜡为唯一碳源的BH培养基中生长较好，说 明其具有较强的分解石油的能力。经Biolog细菌自动鉴定仪鉴定，同时进一步通过PCR扩增获得该菌的16S rDNA，并测序。对其16SrDNA分析表明，该菌株与GenBank中的醋酸钙不动杆菌同源性为97％，确定该菌可 能为醋酸钙不动杆菌(Acinetobactercalcoaceticus)。 关键词 石油降解菌；乳化；分离与鉴定 中图分类号 093．331 文献标识码 A 石油是由数百种化合物组成的复合体。根据性 的增加，从而对土壤中的微生物产生毒害作用，限制 质一般将其分为四类：饱和烃(包括正链烷烃、支链 了其在生物修复中的应用。生物表面活性剂是由微 烷烃和环烷烃)、芳香烃(包括单环、双环和多环芳烃 生物产生的具有表面活性的两性化合物，与化学表 以及带有烷基侧链和融合的环烷烃)、树脂(由嘧啶、 面活性剂相比其具有特异性强、高效、低毒、不污染 喹啉、咔唑、噻吩、亚砜、氨基化合物组成的复合体) 环境以及生产低成本等优点心J。利用其能够乳化原 以及沥青质(环烷酸、硫化物、多元酚、脂肪酸、金属 油增强油的水溶性的特性，在清理储油罐以及二次 卟啉的复合物)。其中有些成分有致癌变、致突变、 采油上已有成功的应用K'7J。 致畸变作用，并能通过食物链在动植物及人体内富 但是，目前对于石油污染土壤的生物修复研究主 集，被列为重点污染物uj。 要集中在高效石油降解菌的筛选与构建以及添加营养 石油污染对自然环境的破坏以及对人类健康造 物质、以及增加土壤中空气流通等方面旧03|。筛选和 成的威胁，使人们不得不寻找治理的方法。生物修 应用具有产生物表面活性剂能力的石油降解菌并通过 复由于具有不造成二次污染、费用低、原位降解污染 对其乳化条件的研究来增强污染土壤中油的生物可利 物等优点心j，因而是一种极有前途的技术。但是采 用性，进而对石油污染土壤修复实为鲜见。因此，本文 用生物修复石油污染的土壤面临石油难溶于水生物 从油田土壤中分离出一株具有高效乳化能力的石油降 可利用性低，单纯的石油降解菌难以与之接触从而 解菌并对其乳化条件进行了研究，最后还通过Biolog 造成修复率低等问题。有研究表明，表面活性剂可 和16SrDNA序列分析对其进行了鉴定。 以乳化污染土壤中不溶性有机物，使它们的解吸附 增强，水溶性增加b'4 J。然而，使用表面活性剂并不 1材料与方法 总是增强不溶性有机污染物的降解性。Bruheim 等∞o的研究表明，化学表面活性剂的加入有时甚至 1．1供试材料 会使这些物质的降解性减弱。这可能是由于化学表 分离菌种的土壤采自不同石油污染区(南京花 面活性剂的自身毒性，或是其使溶液中污染物浓