黄连提取物诱导MCF-1乳腺癌细胞IFN-β和TNF-α表达有效部位初步与研究.pdfVIP

黄连提取物诱导MCF一7乳腺癌细胞l FN—B和TNF—Q表达有效部 位的初步研究 中文摘要 【目的】 乳腺癌是一种严重危害女性身心健康的最常见恶性肿瘤，据统计，全球每年约 有120万妇女患乳腺癌，在西方国家与地区其发病率和死亡率均居女性恶性肿瘤之 首。最近有报道称，黄连可以诱导乳腺癌细胞表达IFN—p和1NF-a，并抑制癌细胞的 增殖，促进癌细胞凋亡。IFN．p临床上主要用于抗病毒治疗，并可与n吓．a协同作用 促进肿瘤细胞的凋亡。但是对于黄连中引起细胞凋亡作用的具体成分还不能确定。因 此，在前期实验的基础上，本实验通过大孔树脂分离黄连提取物，初步研究黄连提 达的部位。为进一步开发抗乳腺癌药物打下基础。 【方法】 用不同浓度梯度乙醇做流动相，采用大孔树脂分离黄连提取物并运用薄层色谱 进一步鉴定组份；Hocchst33258染色后荧光显微镜观察肿瘤细胞形态学的变化；流 式细胞仪检测黄连提取物各层析组份作用MCF．7后细胞周期的变化；MTT法检测各 mIⅢA的表达。 【结果】 1．经大孔树脂分离得到了四种组份A、B、C、和D，并经薄层层析初步鉴定，含 小檗碱、巴马汀在内的生物碱成分，可能在组份B(35％乙醇层析组份)或组份C(70％ 乙醇层析组份)中，绿原酸等可能在组份B中。 2．对层析组份A、B、C、D在24h、48h、72正个时间点进行M丌检测结果显示： 组份B的IC50值最低，因此组份B对乳腺癌细胞的抑制作用最强，层析组份A、B、C、 的IC50值分别为：28．6嵋／Inl、3．65pg／lnl、8．66p∥nll、32．45肛∥IIll。 3．经大孔树脂分离得到的组份B在lOp∥nll时可诱导细胞发生凋亡，荧光显微镜 下观察其形态，可看到较明显的凋亡形态学变化，胞体缩小、胞浆浓缩、核染色质 聚集、核固缩。而组份A、组份C和组份D处理的细胞和对照组细胞相比无明显变化。 4．流式细胞仪检测，黄连提取物层析组份B作用癌细胞后，细胞被阻滞于Gl／吼 期，细胞聊妊合成被抑制。 5．硎-time PcR结果显示，黄连提取物可以促进乳腺癌细胞McF_7有效表达 IFN—p和n师吨，效果明显。在浓度范围2肛咖l～8“∥“里，组份B均促进乳腺癌细 胞表达IFN．p，并且组份B4p∥1nl处理时对细胞表达IFN．p的诱导作用最大。而组份A、 组份C、组份D不同浓度处理时对细胞表达IFN—p的影响不同：组份A(2肛鲋叫和 达IFN．p。在浓度范围2p酌：Ill～8p∥血里，各层析组份均促进乳腺癌细胞表达Tl呵F吨； 组份A2p咖l处理组和组份C8p咖l处理组的细胞帆表达水平与对照组相比差 组的细胞帆表达水平与对照组相比差异有非常显著性(PO．01)。 【结论】 经大孔树脂分离得到的组份B能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7生长增殖，并诱导细 胞发生凋亡，而且能够阻滞细胞于Gl／Go期，而其它组份没有这种作用。另外，组份 B能诱导该肿瘤细胞表达IFN．p和’INF吨，推测这种诱导作用与其促发肿瘤细胞凋亡 有关，具体的凋亡机制还需进一步研究。 【关键词】黄连提取物：大孔树脂；细胞凋亡；细胞周期；IFN—p；TNF吨 2 The ofE蜀fectivePal．tsof Rh娩oma Preliminary study Coptidis Extractonthe of andTNF吨inMCF一7Breast ExpressionIFN—p CancerCeUs ABSTRACT c锄cerisoneoftllemostcommon ttlmorwllichh鹬 ectiVe：Brcast obj malignant