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第 14 卷 第 1 期 中 国 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 报 V o l14,N o 1 1998 年 2 月 Ch in e se Jou rn a l o f B io ch em ist ry an d M o lecu lar B io lo gy F eb. 1998　 - 葡萄糖苷酶的分离纯化和性质研究 孙迎庆　曹淑桂 　韩四平 ( 吉林大学酶工程国家重点实验室, 长春　130023) 摘要　 葡萄糖苷酶是纤维素酶的重要组分之一, 它不仅可水解纤维二糖和寡糖, 更可解除纤 维二糖对 1, 4内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的抑制, 提高水解速率和程度. 利用 Sep h adex 150 和 50 层析法从黑曲霉变异株 22 中分离提纯了 葡萄糖苷酶, 该 G D EA E Sep h adex A L 酶是由两个分子量相同的亚基组成的二聚体, 每个亚基分子量为 203 kD. 该酶最适pH 为 4 8, pH 稳定范围在 36～ 64; 最适温度是 60 ℃, 温度稳定范围为 4～ 60 ℃; 酶分子含糖量为 835%. 它是一个酸性 葡萄糖苷水解酶, 专一性地水解 糖苷键. 而不水解 糖苷键, 对短 链底物表现了相对高的活力. 用动力学分析和共价化学修饰方法探讨了与该酶活力有关的必 需基团. 由 对 m 和 m m 的影响, 推测出酶活性部位至少有两个可解离基团为酶活 pH lgV lgV K 性所必需, 它们在酶底物复合物中的p K es1 和p K es2 的值分别为 4 0 和 56, 在游离酶中的p K 值分别为 4 2 和 59. 由此可初步判断这两个可解离基团可能为组氨酸和含羧基的氨基酸, 它 们与酶的催化和底物结合可能有关. 关键词: 葡萄糖苷酶, 分离纯化, 动力学, 底物专一性, 22. A sp erg illus n ig er L - Pur if ica t ion an d Propert ie s of gluco s ida se f rom A sp erg illu s n ig er L - 22 　 　 Sun Y in g Q in g Cao Shu Gu i H an Si P in g ( , 130023) N a tiona l L abora tory of E nzy m e E ng ineer ing Chang chun