实验可见分光光度法测定Fe3+的含量.pptVIP

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2017-09-02 发布于重庆
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实验可见分光光度法测定Fe3+的含量.ppt

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分光光度法测定蛋白质的含量通过绘制物质吸收曲线选择物质最大吸收波长。掌握分光光度计的使用方法。掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。了解蛋白质含量测定在医学中的应用。一、目的二、原理朗伯-比尔定律：A = ?·b·c 吸收曲线——?max 标准曲线——含量双缩脲在碱性溶液中能与Cu2+作用形成紫红色的络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多肽键，与双缩脲结构相似，故也能发生此反应，产生紫红色络合物，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。分光光度计结构：可见分光光度计紫外分光光度计光源单色器吸收池检测器指示器三、内容 1、取50ml容量瓶6只按下表配制标准溶液和未知溶液，等待20分钟；编号体积（ml）试剂空白（1）（2）（3）（4）未知标准蛋白质溶液 10mg/ml 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 3.00 双缩脲试剂 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 0.9%生理盐水稀释至50ml刻度线蛋白质浓度 2、取空白液和（4）号液测定A值，范围460~600nm，绘制吸收曲线，找出?max ； 3、在?max条件下，测定（1）~（4）号及未知液的A值； 4、吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标，得标准曲线，求出蛋白质含量。四、实验结果 1、吸收曲线 2、标准曲线 ?（nm） 460 480 500 520 528 532 534 536 538 540 A ?（nm） 542 544 546 548 550 552 556 560 580 600 A 体积（ml）试剂空白（1）（2）（3）（4）未知标准蛋白质溶液 10mg/ml 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 3.00 双缩脲试剂 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 0.9%生理盐水稀释至50ml刻度线蛋白质浓度编号注意事项分光光度计在使用之前须预热20分钟。手不能接触比色皿的透光部分，如果透光部分表面有污渍、溶液痕迹，应用滤纸擦干。思考题在吸光度的测量中，为了减小误差，应控制吸光度在什么范围内？为什么待测溶液与标准溶液的测定条件要相同？为什么选择试剂空白？其作用是什么？